雙柏凝膠劑中大黃素測定實驗論文
1 儀器與試藥
1.1 儀器高效液相色譜儀（日本島津）：LC-10ATvp雙泵，SLC-10Avp控制器，SPD-10Avp紫外檢測器，CTO-10ASvp柱溫箱。
1.2 試藥大黃素對照品由中國藥品生物制品檢定所提供（批號為0756-9908）；甲醇為色譜純；大黃、黃柏、澤蘭、側(cè)柏葉、薄荷由柳州市神農(nóng)中藥飲片廠提供，經(jīng)柳州市中醫(yī)院藥檢室鑒定，符合《中國藥典》要求；其余試劑均為分析純。
2 方法與結(jié)果
2.1 凝膠劑的制備取處方量的大黃（A）和根據(jù)雙柏散處方比例稱取藥材粗粉（B），均加95%乙醇浸泡6 h，以5～7 ml/min的速度滲漉提取，相應(yīng)滲漉液濃縮至約50 g，加入3 g 卡波姆940，密閉放置過夜使其充分溶脹，加蒸餾水至100 g，研勻即得。分裝于密閉避光的'容器中，貯存于涼處。A：大黃凝膠；B:雙柏凝膠
2.2 建立測定方法
2.2.1 色譜條件
色譜柱為選Kromasil- C18 柱（5μm，250 mm×4.6 mm）；流動相為甲醇-水（6:4）；流速1.0 ml/min；檢測波長254 nm；柱溫30℃；進樣量：10 μl。
2.2.2 對照品溶液制備
精密稱取大黃素對照品5 mg，加甲醇溶解定容至25 ml，制成0.2 mg/ml的溶液，即可。
2.2.3 供試品溶液制備
精密稱取凝膠劑1 g，水浴濃縮至近干，加蒸餾水10 ml，濃鹽酸1 ml，沸水浴中水解30 min，再加氯仿20 ml，超聲振蕩20 min，置分液漏斗中分層，取氯仿層；水層用氯仿洗3次，每次10 ml，合并氯仿液，揮干。加適量甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至10 ml容量瓶中，超聲振蕩數(shù)分鐘使溶解完全，加甲醇至刻度，搖勻。針孔式微孔濾膜過濾，棄去初濾液，取續(xù)濾液作為供試品溶液。
2.2.4 線性關(guān)系
考察精密吸取對照品溶液用流動相稀釋成0.4，1.0，2.0，4.0，10.0 μg·ml-1進樣10 μl測定，以大黃素進樣量（Y）和峰面積（X）進行線性回歸，求得標(biāo)準曲線的回歸方程為：Y=3 300.3X-1 422，r=0.999 8。結(jié)果表明大黃素進樣量在0.4～10 μg·ml-1范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。
2.2.5 精密度實驗
精密吸取上述對照品溶液10 μl，重復(fù)進樣測定5次，結(jié)果大黃素峰面積值的RSD=0.59%，表明儀器精密度良好。取供試品溶液，于0，1，2，3 h分別進樣測定峰面積，結(jié)果RSD=0.42%。表明供試品在3 h內(nèi)穩(wěn)定。實驗全部選擇雄性昆明小鼠可便于取皮操作及結(jié)果數(shù)據(jù)的平行。同時以高效液相色譜法為離體鼠建立了可靠的體外測定方法，在滲透實驗中，由于皮膚與介質(zhì)長時間接觸，皮膚中蛋白質(zhì)等物質(zhì)易脫落，溶解，會導(dǎo)致混濁或呈乳光，本文酸化樣液以游離出脂溶性大黃素，然后氯仿提取，從而消除了皮膚中蛋白等成分對色譜柱的影響。
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