石韋醇提取物不同極性部位的抑菌試驗(yàn)觀察論文
1 儀器與材料
1.1 儀器與材料
超凈工作臺、手提式滅菌鍋、恒溫控制箱、冰箱、游標(biāo)卡尺、鑷子、接種針、三角瓶等；石油醚、醋酸乙酯、乙醇、正丁醇等試劑均為分析純。實(shí)驗(yàn)材料于2007?11 采自廣西武鳴大明山國家級水源林保護(hù)區(qū)海拔1 200 m的沿路石壁上或亂石堆環(huán)境中，經(jīng)廣西大學(xué)植物分類學(xué)黎樺副教授鑒定為石韋P. lingua，將地上部洗凈，自然風(fēng)干后磨成粉末，過40目篩備用。
1.2 供試菌種
供試細(xì)菌：大腸桿菌Escherichia coli，普通變形桿菌Proteus vulgaris，金黃色葡萄球菌Staphylococcus aureus，枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis，藤黃八疊球菌Sarcina lutea。供試真菌：黃曲霉Aspergillus flavas，青霉Penicillium sp.，黑曲霉Aspergillus niger。
以上菌種均由廣西大學(xué)農(nóng)學(xué)院植物保護(hù)系微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供。
1.3 培養(yǎng)基細(xì)菌用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)，真菌用馬鈴薯培養(yǎng)基［5］培養(yǎng)。
2 方法
2.1 菌懸液或孢子懸液制備采用平板菌落計(jì)數(shù)法［5］。將受試菌在斜面培養(yǎng)基活化2～3代后，用接種環(huán)從斜面上刮菌苔兩環(huán)，分別收集到內(nèi)盛有100 ml無菌水的250 ml的三角瓶中，將受試菌配成終濃度0.1×107個(gè)/ml的菌懸液，備用。
2.2 樣液制備石韋地上部醇提取物不同極性部位的制備：稱取粉碎好的石韋樣品4 kg，用體積分?jǐn)?shù)90%乙醇將樣品浸泡3次（料液比 1∶15），每次7 d ，提取液在40°C下減壓蒸餾，回收溶劑，得乙醇浸膏。將乙醇浸膏懸浮于蒸餾水，先后用石油醚、醋酸乙酯、正丁醇和蒸餾水萃取，分別得石油醚、醋酸乙酯、正丁醇和水4部分萃取物，同前濃縮，即得各極性部位。
2.3 石韋抗菌作用的檢測方法采用紙片擴(kuò)散法進(jìn)行抑菌試驗(yàn)［6］。在超凈工作臺上將滅菌后的牛肉蛋白胨培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中，每皿15 ml，放置冷卻。用無菌移液管取0.1 ml細(xì)菌液加于平皿中均勻涂布于平板（內(nèi)徑 90 mm）表面后。取經(jīng)滅菌的標(biāo)準(zhǔn)濾紙（直徑 6 mm），分別蘸取石韋醇提物的不同極性部位并貼于平板表面，每個(gè)培養(yǎng)皿放3片濾紙，以蒸餾水、石油醚為對照液。細(xì)菌于37℃培養(yǎng)24 h 、真菌于28℃培養(yǎng)48 h后，檢測抑菌環(huán)的有無并測量抑菌環(huán)直徑，每種提取液對8種供試菌重復(fù)測定3次，結(jié)果取平均值。出現(xiàn)抑菌環(huán)的菌株才作MIC檢測。最小抑菌質(zhì)量濃度的檢測采用紙片擴(kuò)散法方法同“2.3”，將各溶液稀釋成100，50，25，12.5，6.25，3.125 mg/ml 的質(zhì)量濃度梯度，以未見抑菌環(huán)的最高質(zhì)量濃度為MIC。
3 結(jié)果
最小抑菌濃度比較由表2可知，石韋醇提取物不同極性部位對受試菌的抑菌效果顯示量效關(guān)系。在低濃度時(shí)，無抑菌活性，抑制環(huán)基本上隨藥液質(zhì)量濃度的增加而提高，抑菌活性漸顯出來，由此可看出石韋提取物不同極性部位的.最小抑菌濃度。只有正丁醇相對大腸桿菌有抑菌效果，對大腸桿菌的最小抑菌濃度為50 mg/ml。醋酸乙酯相、正丁醇相和蒸餾水相對普通變形桿菌的最小抑菌濃度分別為50，25 mg/ml和12.5 mg/ml，這三相對枯草芽孢桿菌的最小抑菌濃度分別為50，25 mg/ml和12.5 mg/ml，對八疊球菌最小抑菌濃度分別為25，25.00，12.5mg/ ml（見表3），可見，水相的最小抑菌質(zhì)量濃度最小，其次是正丁醇。石韋地上部醇提物抗菌具有廣譜性，對 5 種細(xì)菌均有不同程度的抑殺活性。
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