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生化實(shí)驗(yàn)試題參考
篇一:生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)考試試題(完整版)
生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)
二、填空題:
1. 測(cè)定蛋白質(zhì)含量的方法有(雙縮脲法), (紫外吸收法),( Folin-酚試劑法(或Lowry法) )和 (考馬斯亮
藍(lán)G-250染色法)。
2. CAT能把H2O2分解為H2O和O2,其活性大小以(以一定時(shí)間內(nèi)分解的H2O2量)來(lái)表示,當(dāng)CAT
與H2O2反應(yīng)結(jié)束,再用 (碘量法) 測(cè)定未分解的H2O2。
3. 聚丙烯酰胺凝膠電泳是以 (聚丙烯酰胺凝膠) 作為載體的一種區(qū)帶電泳,這種凝膠是由(Acr) 和交聯(lián)劑(Bis) 在催化劑作用下聚合而成;瘜W(xué)聚合法一般用來(lái)制備(分離)膠,其自由基的引發(fā)劑是(Ap),催化劑是(TEMED) ;光聚合法適于制備大孔徑的(濃縮)膠,催化劑是(核黃素) 。
4.層析技術(shù)按分離過(guò)程所主要依據(jù)的物理化學(xué)性質(zhì)進(jìn)行分類(lèi),可分成以下幾種:(吸附層析),(分配層析 ),(離子交換層析),(凝膠層析 )和 (親和層析) 。
5. 使用離心機(jī)離心樣品前,必須使離心管(等重)且對(duì)稱放入離心機(jī)。
6. 米氏常數(shù)可近似表示酶和底物親合力,Km愈小,表示E對(duì)S的親合力愈(大) ,Km愈大,表示E對(duì)S
的親合力愈(。 。
7. 分光光度計(jì)在使用之前必須預(yù)熱,注意預(yù)熱及樣品槽空時(shí)必須__(打開(kāi))____(打開(kāi)、合上)樣品池翻蓋。
8. CAT是植物體內(nèi)重要的酶促防御系統(tǒng)之一,其活性高低與植物的(抗逆性)密切相關(guān)。
9. 紙層析實(shí)驗(yàn)中,____________形成固定相,____________流動(dòng)相。
10. 聚丙烯酰胺凝膠是是由 和交聯(lián)劑 在催化劑作用下聚合而成的,在具有自
由基團(tuán)體系時(shí),兩者就聚合。引發(fā)產(chǎn)生自由基的方法有兩種:(化學(xué)法)和(光聚合法)。
11. 層析技術(shù)按按固定相的使用形式進(jìn)行分類(lèi),可分成以下幾種:(柱層析),(紙層析),(薄層層析)和(薄
膜層析)。
參考答案:
生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)
一、名詞解釋?zhuān)?/p>
1、電泳:指帶電粒子在電場(chǎng)中向與其自身所帶電荷相反的電極方向移動(dòng)的現(xiàn)象。
2、同工酶:指催化同一種化學(xué)反應(yīng),但其酶蛋白本身的分子結(jié)構(gòu)組成卻有所不同的一組酶。
3、分配層析法:用物質(zhì)在兩種或兩種以上不同的混合溶劑中的分配系數(shù)不同,而達(dá)到分離目的的一種實(shí)驗(yàn)方法。
4、酶活性:酶催化化學(xué)反應(yīng)的能力,往往以酶促反應(yīng)的初速度表示。
5、分光光度法:基于溶液對(duì)光吸收的大小來(lái)確定被測(cè)組份的含量的分析方法稱為分光光度法或吸光光度法。
6、層析技術(shù):是利用被分離的混合物中各組分的理化性質(zhì)(分子的形狀和大小、分子極性、吸附力、
分子親和力、分配系數(shù)等)的不同,使各組分以不同程度在流動(dòng)相和固定相中進(jìn)行分配,最終達(dá)到分離
目的。
7、比活力:即每毫克酶蛋白所含酶的活力單位數(shù)。比活力高,表示酶純度高。
二、填空題:
9. 丙烯酰胺單體(Acr),N,N’-甲叉雙丙烯酰胺(Bis)
1、簡(jiǎn)述4種測(cè)定蛋白質(zhì)含量的方法及其原理。
答:(1)考馬斯亮藍(lán)G-250染色法:
考馬斯亮藍(lán)G-250結(jié)合蛋白質(zhì)后,形成藍(lán)色CBG-蛋白質(zhì)結(jié)合物,最大光吸收在595nm。在一定的蛋白質(zhì)濃度范圍內(nèi)(10-1000ug/ml),CBG-蛋白質(zhì)結(jié)合物的O.D595nm值與蛋白質(zhì)含量成正比,故可用分光光度法進(jìn)行蛋白質(zhì)的定量測(cè)定。
。2)雙縮脲法:
蛋白質(zhì)含有兩個(gè)以上的肽鍵(-CO-NH-)因此,有雙縮脲反應(yīng),在堿性溶液中蛋白質(zhì)與Cu2+形成紫色絡(luò)合物,其顏色深淺與蛋白質(zhì)含量成正比,而與蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量及aa成分無(wú)關(guān),故可以用來(lái)測(cè)定蛋白質(zhì)含量;
。3)Folin-酚試劑法(Lowry法):
是雙縮脲法的發(fā)展,第一步涉及到堿性溶液中銅蛋白質(zhì)復(fù)合物的形成,然后這個(gè)復(fù)合物還原磷鉬酸-磷鎢酸試劑,產(chǎn)生深藍(lán)色(鉬藍(lán)和鎢藍(lán)混合物)比雙縮脲法靈敏,但費(fèi)時(shí);
。4)紫外吸收法:
蛋白質(zhì)中一些氨基酸殘基中的苯環(huán)含有共軛雙鍵,所以蛋白質(zhì)具有吸收紫外光的性質(zhì),最大吸收峰在280nm處,在一定范圍內(nèi),蛋白質(zhì)溶液的光吸收值與蛋白質(zhì)含量成正比,可用作定量測(cè)定,簡(jiǎn)單、靈敏、快速、不耗樣品,低濃度的鹽類(lèi)不干擾。
。5)微量凱式定氮法:
根據(jù)蛋白質(zhì)的平均含氮量為16%,因此,測(cè)得1g蛋白氮,相當(dāng)于6.25g蛋白質(zhì)。
2、簡(jiǎn)述不連續(xù)聚丙烯酰胺凝膠電泳中的三個(gè)不連續(xù)及三種物理效應(yīng)。
答:三個(gè)不連續(xù):(1)凝膠由上下兩層凝膠組成,兩層凝膠的孔徑不同;
。2)緩沖液離子組成及各層凝膠的pH不同;
。3)在電場(chǎng)中形成不連續(xù)的電位梯度。
三種物理效應(yīng):(1)電荷效應(yīng):酶蛋白按其所帶電荷的種類(lèi)及數(shù)量,在電場(chǎng)作用下向一定的電極以一定的速
度泳動(dòng)。
(2)分子篩效應(yīng):分子量、形狀不同的分子在經(jīng)過(guò)凝膠孔徑過(guò)程中,受到的阻力不同,因此
移動(dòng)速率不等。
。3)濃縮效應(yīng):使待分離樣品中的各組分在濃縮膠中被壓縮成層,使原來(lái)很稀的樣品得到高
度的濃縮。
3、試分析影響電泳的主要因素有哪些?
答:(1)帶電顆粒的大小和形狀:顆粒越大,電泳速度越慢,反之越快;
。2)顆粒的電荷數(shù):電荷越少,電泳速度越慢,反之越快;
(3)電場(chǎng)強(qiáng)度:電場(chǎng)強(qiáng)度越小,電泳速度越慢,反之越快;
。4)溶液的pH值:影響被分離物質(zhì)的解離度,離等電點(diǎn)越近,電泳速度越慢,反之越快;
。5)溶液的粘度:粘度越大,電泳速度越慢,反之越快;
。6)離子強(qiáng)度:離子強(qiáng)度越大,電泳速度越慢,反之越快;
。7)電滲現(xiàn)象:電場(chǎng)中,液體相對(duì)于固體支持物的相對(duì)移動(dòng);
(8)支持物篩孔大小,孔徑越小,電泳速度越慢,反之越快。
篇二:生化實(shí)驗(yàn)試題
改良Lowry氏法測(cè)定蛋白質(zhì)含量,醋纖膜電泳及凝膠層析分離蛋白質(zhì)和SDS-PAGE三個(gè)實(shí)驗(yàn)屬于蛋白質(zhì)的內(nèi)容,琥珀酸脫氫酶的競(jìng)爭(zhēng)性抑制和檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性屬于酶的部分,觀察激素對(duì)家兔血糖濃度的影響涉及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和糖代謝章節(jié)的知識(shí),質(zhì)粒抽提、核酸電泳及PCR屬于分子生物學(xué)的范疇。
一、選擇題
1.本學(xué)期所做的聚丙烯酰胺凝膠電泳實(shí)驗(yàn)主要用來(lái)分離( )
A.核酸B.甘油三酯 C.糖 D.蛋白質(zhì)
2.有關(guān)琥珀酸脫氫酶競(jìng)爭(zhēng)性抑制實(shí)驗(yàn)的論述,錯(cuò)誤的是( )
A.抑制劑結(jié)構(gòu)與底物相似 B.抑制劑與酶的活性中心相結(jié)合
C.抑制劑與酶的結(jié)合是可逆的 D.抑制程度只與抑制劑的濃度有關(guān)
3.某學(xué)生用100ul可調(diào)微量移液器吸取68ul溶液,應(yīng)該將此微量移液器刻度調(diào)為(
A. 068.0 B. 032.0 C. 680.0 D. 006.8
4.用Sephadex G-50分離血紅蛋白和DNP-胰糜蛋白酶的層析方法稱( )
A.離子交換層析 B.凝膠層析
C.親和層析D.高效液相層析
5.在瓊脂糖凝膠電泳中,使核酸在紫外透射儀下顯色的是( )
A.氨基黑B.溴酚藍(lán) C.溴化乙錠 D.考馬斯亮藍(lán)
6.醋酸纖維素薄膜分離血清蛋白質(zhì)時(shí),各血清蛋白的泳動(dòng)速率從小到大依次是(
A.α 1,α 2,β,albumin,γ globin B.a(chǎn)lbumin,α 1,α 2,β,γ globin
C.γ globin ,β,α 2,α 1,albumin D.γ globin,β,α 1,α 2,albumin
7.有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)曲線法的描述,錯(cuò)誤的是 ( )
A.需要配制較多的標(biāo)準(zhǔn)管
B.待測(cè)管吸光度范圍0.05-1.0 為宜
。
C.標(biāo)準(zhǔn)管與待測(cè)管的測(cè)定應(yīng)在相同條件
D.所作標(biāo)準(zhǔn)曲線可供長(zhǎng)期使用
8.一個(gè)基本的PCR反應(yīng)體系應(yīng)該包括()
A.模板,DNA-pol II,PCR Buffer,Mg2+,primase,dNTPS,水
B.模板,Taq酶,PCR Buffer,Ca2+,primers,dNTPS,去離子水
C.模板,DNA-pol II,PCR Buffer,Ca2+,primase,dNTPS,去離子水
D.模板,Taq酶,PCR Buffer,Mg2+,primers,dNTPS,去離子水
9.對(duì)蛋白質(zhì)定量的方法不包括( )
A.凱氏定氮法B.改良Lowry氏法
C.抽提法 D.紫外吸收
10.用分光光度法進(jìn)行定量分析時(shí),基本計(jì)算公式是( )
A.待測(cè)液濃度=(標(biāo)準(zhǔn)液吸光度/待測(cè)液吸光度)×標(biāo)準(zhǔn)液濃度
B.待測(cè)液濃度=(待測(cè)液吸光度/標(biāo)準(zhǔn)液吸光度)×標(biāo)準(zhǔn)液濃度
二、填空題
1.制備聚丙烯酰胺凝膠時(shí)催化劑是。
2.PCR可在體外對(duì)目的基因進(jìn)行高效、快速、特異的擴(kuò)增,它的每個(gè)循環(huán)包括三個(gè)步驟,分別是變性___、___退火____、__延伸___。
3.琥珀酸脫氫酶競(jìng)爭(zhēng)性抑制過(guò)程中,加入液體石蠟的作用是實(shí)驗(yàn)中使用的抑制劑是丙二酸 。
4.ALT或GPT縮寫(xiě)代表,催化的反應(yīng)是 。血清中ALT(GPT)活性單位的定義是:每毫升血清在pH7.4,37℃保溫條件下與底物作用30min后,每生成_2.5_μg的丙酮酸為1個(gè)谷-丙轉(zhuǎn)氨酶活性單位。
5. 分光光度計(jì)使用完畢時(shí),為了延長(zhǎng)儀器的使用壽命,滑桿應(yīng)該放在光源對(duì)準(zhǔn)_1檔和2檔交界處______休息態(tài)__的位置。
6.PCR總反應(yīng)體系的體積是50μl,其中10×buffer加量應(yīng)為_(kāi)5__μl。
7.酵母核酸定量中,總磷管需要進(jìn)行反應(yīng),將有機(jī)磷轉(zhuǎn)變?yōu)樾枰玫闹匾噭┦?,試劑酒精燈加熱反應(yīng)過(guò)程經(jīng)歷顏色變化為 。
8.用離心機(jī)離心前,必須將裝有樣品的離心管_配平_______,并_____對(duì)稱______放置于離
心機(jī)的離心平臺(tái)上,然后蓋好上蓋,才能開(kāi)啟電源。
9.激素對(duì)家兔血糖濃度的影響實(shí)驗(yàn)中,升高血糖的激素是 腎上腺素,降低血糖的激素是 胰島素 。
三、判斷題
1. 蛋白質(zhì)在小于等電點(diǎn)的pH溶液中,帶負(fù)電,電泳時(shí)向正極移動(dòng)。( F )
2. Lambert-Beer定律公式為A=KcL,其中K為消光系數(shù),表示物質(zhì)對(duì)光線吸收的能力。(T)
3. 酵母核酸提取實(shí)驗(yàn)中,甲苯的作用是使蛋白質(zhì)變性。()
4. 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)必需明確待擴(kuò)增基因片段的全部序列。( )
5. 瓊脂糖電泳分離核酸時(shí)(pH7.4),核酸樣品應(yīng)點(diǎn)在負(fù)極端。( T)
6. 血糖測(cè)定實(shí)驗(yàn)中,兔血經(jīng)加抗凝劑離心后所得到的上清液是血清。( F )
四、簡(jiǎn)答題
1.簡(jiǎn)要敘述分光光度計(jì)使用方法。
開(kāi)機(jī),調(diào)至要使用的波長(zhǎng),預(yù)熱20min
將待比溶液倒至比色杯中,高度為2/3-4/5,手拿毛面,朝向自己,放入樣品室
調(diào)至T檔,拉桿拉至0檔(空白管),調(diào)節(jié)T=100%
拉桿拉至1檔,調(diào)節(jié)T=0
調(diào)至A檔,拉桿拉至2,3。。。檔,讀取標(biāo)準(zhǔn)液、待測(cè)液的吸光度
取出后關(guān)機(jī)
2. 簡(jiǎn)述改良Mohum法測(cè)定谷丙轉(zhuǎn)氨酶GPT活性實(shí)驗(yàn)中對(duì)照管的作用?
五、實(shí)驗(yàn)計(jì)算題
1. 采用鄰甲苯胺法測(cè)定血糖濃度。
葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液(0.4 mg/ml)取0.5ml,待測(cè)血漿取0.1ml。
鄰甲苯胺顯色(反應(yīng)總體積均為7ml)后,620nm波長(zhǎng)比色,以空白管調(diào)零后讀得:A標(biāo) = 0.400;A測(cè) = 0.220
請(qǐng)按照上述條件采用標(biāo)準(zhǔn)管法計(jì)算待測(cè)血漿中血糖的濃度(以mg/100ml為單位)。 C=(0.220/0.1)/(0.400/0.5)*0.4*100=110
篇三:生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)理論考試題答案
生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)理論考試題答案
1. 醋酸纖維薄膜電泳時(shí)點(diǎn)樣端應(yīng)靠近電極的哪一端,為什么?
答;電泳時(shí)點(diǎn)樣端應(yīng)靠近負(fù)極,因?yàn)檠逯懈鞣N蛋白質(zhì)在PH為8.6的環(huán)境中均帶負(fù)電,根據(jù)同性相吸,異性相斥原理,點(diǎn)樣端在負(fù)極時(shí)蛋白質(zhì)向正極泳動(dòng)從而實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)分離。
2. 用分光光度計(jì)測(cè)定物質(zhì)含量時(shí),設(shè)置空白對(duì)照管的作用,為什么?
答;空白對(duì)照是為了排除溶劑對(duì)吸光度的影響。溶液的吸光度表示物質(zhì)對(duì)光的吸收程度,但是作為溶劑也能吸收,反射和透射一部分的光,因此必須以相同的溶劑設(shè)置對(duì)照,排除溶劑對(duì)吸光度的影響。
3. 簡(jiǎn)述血清蛋白的醋酸纖維薄膜的電泳原理?
答;血清蛋白中各種蛋白質(zhì)離子在電場(chǎng)力的作用下向著與自身電荷相反的方向涌動(dòng),而各種蛋白質(zhì)等電點(diǎn)不同,且在PH為8.6時(shí)所帶電荷不同,分子大小不等,形狀各有差異,所以在同一電泳下永動(dòng)速度不同從而實(shí)現(xiàn)分離。
4. 何謂Rf值?影響Rf值的因素?
答;Rf是原點(diǎn)到層析中心的距離與原點(diǎn)到溶劑前沿的距離之比。Rf的大小與物質(zhì)的結(jié)構(gòu),性質(zhì),溶劑系統(tǒng),層析濾紙的質(zhì)量和層析溫度有關(guān),對(duì)同一種物質(zhì)來(lái)講Rf是一個(gè)常量。
5. 什么是鹽析?鹽析會(huì)引起蛋白質(zhì)的變性嗎?一般用什么試劑?
答;鹽析是指當(dāng)溶液中的中性鹽持續(xù)增加時(shí),蛋白質(zhì)的溶解度下降,當(dāng)中性鹽的濃度達(dá)到一定程度的時(shí)候,蛋白質(zhì)從溶液中析出的現(xiàn)象。鹽析不會(huì)引起蛋白質(zhì)的變性,因?yàn)榈鞍踪|(zhì)的結(jié)構(gòu)并未發(fā)生改變,去掉引起鹽析的因素蛋白質(zhì)仍能溶解;一般用飽和硫酸銨溶液進(jìn)行鹽析
6. 簡(jiǎn)述DNS法測(cè)定還原糖濃度的實(shí)驗(yàn)原理?
答;還原糖與DNS在堿性條件下加熱被氧化成糖酸,而DNS被還原為棕紅色的3-氨基-5-硝基水楊酸。在一定范圍內(nèi)還原糖的量與3-氨基-5硝基水楊酸顏色的深淺成正比,用分光光度
計(jì) 測(cè)出溶液的吸光度,通過(guò)查對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線可計(jì)算出3-氨基-5硝基水楊酸的濃度,從而得出還原糖的濃度。
7. 影響蛋白質(zhì)沉淀的因素是什么?沉淀和變性有什么聯(lián)系?
答;水溶液中的蛋白質(zhì)分子由于表面形成水化層和雙電層從而形成穩(wěn)定的親水膠
體顆粒,在一定的理化因素影響下蛋白質(zhì)顆粒因失去電荷和脫水而沉淀。這些因素包括溶液的酸堿度、鹽溶液的濃度、溫度、重金屬離子以及有機(jī)溶劑等。變性蛋白質(zhì)不一定沉淀,沉淀的蛋白質(zhì)不一定變性。沉淀時(shí)蛋白質(zhì)可能仍然保持天然構(gòu)像,而變性是蛋白質(zhì)的高級(jí)結(jié)構(gòu)被破壞失去活性。
8. 簡(jiǎn)述薄層層析法分離糖類(lèi)的原理/?
答;薄層層析的實(shí)質(zhì)就是吸附層析,也就是在鋪有吸附劑的薄層上,經(jīng)過(guò)反復(fù)地被吸附劑吸附以及被擴(kuò)展劑擴(kuò)展的過(guò)程。而吸附劑對(duì)不同的物質(zhì)的吸附力不同,從而使糖在薄層上的涌動(dòng)速度不同達(dá)到分離的目的
9. 等電點(diǎn)的定義?蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)時(shí)有哪些特點(diǎn)?
答;當(dāng)溶液的PH為一定數(shù)值時(shí),其中的蛋白質(zhì)正負(fù)電荷相等,即凈電荷為零,此時(shí)的PH值就是該蛋白質(zhì)等電點(diǎn)。蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)時(shí)的溶解度最小。
10. 蛋白質(zhì)顯色黃色反應(yīng)的原理是什么?反應(yīng)結(jié)果為什么深淺不一?
答;含有苯環(huán)的氨基酸如酪氨酸和色氨酸,能被硝酸硝化成黃色的物質(zhì),而且不同蛋白質(zhì)中所含的苯環(huán)數(shù)量不同,造成與試劑反應(yīng)的程度不同,因此呈現(xiàn)顏色深淺不一 。
11. RNA水解后的三大組分是什么?怎樣各自驗(yàn)證的?
答;核糖,磷酸,嘌呤堿。核糖+苔黒酚—Fe(濃HCI)綠色物質(zhì);磷酸+鉬酸銨——藍(lán)色;嘌呤堿+硝酸銀——白色
12. 等電點(diǎn)時(shí)為什么蛋白質(zhì)溶解度最低?
答;蛋白質(zhì)形成膠體二等條件是帶電荷,從而在外表面形成水化膜,導(dǎo)致各膠體顆粒不結(jié)合,當(dāng)PH等于PI時(shí),靜電荷為零,蛋白質(zhì)分子之間不存在排斥,則聚集沉淀,所以在等電點(diǎn)時(shí)溶解度最小。
13. 雞蛋清可以用作鉛汞中毒的解毒劑是為什么?
答;由于重金屬離子能與蛋白質(zhì)中帶負(fù)電基團(tuán)如—COOH等作用,生成難溶重金屬的蛋白質(zhì)鹽,減少機(jī)體對(duì)重金屬的吸收。
14. 血清醋酸纖維薄膜電泳可將血清蛋白依次分為哪幾條帶?哪帶電泳最
快?影響電泳速度有哪些?
答;有血清蛋白、a1-球蛋白、a2-球蛋白、b-球蛋白、r-球蛋白;其中血清蛋白點(diǎn)用最快。影響因素蛋白質(zhì)所帶電荷數(shù),分子大小與形狀以及緩沖液濃度。
15. 什么是抑制劑?什么是變性劑?區(qū)別是什么?
答;凡是能使酶活性降低而不使酶失活變性的物質(zhì)成為抑制劑;凡是能引起蛋白質(zhì)變性失活的物質(zhì)叫變性劑。抑制劑只是抑制蛋白質(zhì)的特性而變性劑則破環(huán)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)。
16 簡(jiǎn)述橘皮中提取果膠原理?
答;果膠不溶于乙醇的原來(lái)將其沉淀得到果膠。
17 離心管如何在天平上平衡?操作離心時(shí)應(yīng)注意什么?
答;把放在小燒杯中的離心管(包括蓋子)和管套放在平衡的天平上,用膠頭滴管取離心液調(diào)平。注意點(diǎn):配平、等重的試管放在對(duì)稱的位置;啟動(dòng)時(shí)要先蓋好蓋子,停止后才能開(kāi)蓋;有不正常的聲音時(shí)應(yīng)按STOP鍵,而不是POWER鍵;禁止把小而中的東西放在離心機(jī)上以防傷人。
篇四:生化實(shí)驗(yàn)題庫(kù)
生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)考核試題庫(kù)
要求:參加考核的每位學(xué)生須從1-6號(hào)題中隨機(jī)抽1題,從7-12號(hào)題中隨機(jī)抽1題,從13-37號(hào)題中隨機(jī)抽1題,從38-46號(hào)題中隨機(jī)抽1題,共計(jì)4道考核題進(jìn)行考核,總分為60分。
一、理論考核題
1鹽析和鹽溶(3分) 2電泳(3分) 3層析(色譜)(3分) 4酶的活力單位(3分)5比活力(3分) 6分子篩效應(yīng)(3分) 7電泳的原理(4分)
8離子交換層析的原理(4分)9親和層析的原理(4分)
10凝膠過(guò)濾層析的原理(4分)
11吸附層析的原理(4分)
12透析技術(shù)的基本原理及其應(yīng)用(4分)
13聚丙烯酰胺凝膠電泳的主要優(yōu)點(diǎn)及用途(6分)
14按層析過(guò)程的機(jī)理,層析法分哪四類(lèi)?按操作形式不同又分哪三類(lèi)?(7分) 15普通離心機(jī)的使用注意事項(xiàng)?(6分)
16可見(jiàn)分光光度計(jì)的使用注意事項(xiàng)?(6分)
17蛋白質(zhì)含量測(cè)定的常用方法有那些?(6分)
18粗脂肪的提取和含量測(cè)定的基本原理(6分)
19索氏提取器是由哪幾部分組成的?(6分)
20粗脂肪的提取和含量測(cè)定的簡(jiǎn)要操作步驟(6分)
21粗脂肪的提取實(shí)驗(yàn)中如何減少誤差?(6分)
22凱氏定氮法測(cè)定總氮量的基本原理(6分)
23凱氏定氮實(shí)驗(yàn)中用到的主要器材有哪些?(6分)
24核酸的含量測(cè)定常用的方法有哪些?(6分)
25雙倒數(shù)法測(cè)定米氏常數(shù)的基本原理(6分)
26雙倒數(shù)法測(cè)定米氏常數(shù)的實(shí)驗(yàn)中,決定實(shí)驗(yàn)成敗的因素有哪些?關(guān)鍵因素是什么?(7分)
27生物細(xì)胞的破碎的常用方法有哪些?(6分)
28酶的制備及提取過(guò)程中常注意哪些事項(xiàng)?(6分)
29蛋白質(zhì)的分離常用的方法有哪些?(6分)
30甲醛滴定法測(cè)定氨基酸的基本原理(6分)
31為什么SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳可以用來(lái)測(cè)定未知蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量?(6分) 32連續(xù)聚丙烯酰胺凝膠電泳與不連續(xù)聚丙烯酰胺凝膠電泳有什么不同?(6分) 33聚丙烯酰胺凝膠電泳的優(yōu)點(diǎn)?(6分)
34瓊脂糖凝膠電泳的優(yōu)點(diǎn)?(6分)
35提取某種植物組織中的總DNA時(shí),使用的細(xì)胞提取液中的主要試劑成分是什么?各有什么作用?(7分)
36如何證明提取到的某種核酸是DNA還是RNA?(6分)
37聚丙烯酰胺凝膠電泳分離血清蛋白時(shí),使用的電泳緩沖液PH=8.3,那么樣品應(yīng)點(diǎn)在哪端?為什么?(6分)
二、技能或?qū)嶒?yàn)操作考核題
38說(shuō)明紙層析和離子交換層析分離氨基酸混合物的方法是根據(jù)氨基酸的什么性質(zhì)? 列出紙層析和柱層析的一般操作步驟。(10分)
39凝膠電泳的一般操作步驟(11分)
40普通離心機(jī)的使用操作(示范)(10分)
41可見(jiàn)分光光度計(jì)的使用操作(示范)(10分)
42如果要105攝氏度干燥某種物質(zhì),如何使用干燥箱(示范)? (10分)
43要稱取某種藥品2.0g,如何使用天平(示范)?(10分)
44要配制500ml 0.01mol/L的NaOH溶液應(yīng)如何配制?(10分)
45配制1L 0.01mol/L的HCl溶液應(yīng)如何配制(已知濃鹽酸比重是1.19g/L,重量百分比濃度為36.5%)?(11分)
46分別配制出10μg/ml,5μg/ml,2μg/ml,1μg/ml的DNA標(biāo)準(zhǔn)溶液,應(yīng)如何配制?(盡可能節(jié)約)(10分)
答案:
1、鹽析和鹽溶:鹽析:在蛋白質(zhì)溶液中加入一定量的高濃度中性鹽(如硫酸氨),使蛋白質(zhì)溶解度降低并沉淀析出的現(xiàn)象稱為鹽析。鹽溶:加入少量中性鹽可增加蛋白質(zhì)的溶解度,即鹽溶現(xiàn)象。
2、電泳:帶電粒子在直流電場(chǎng)中向著 所帶電性相反的電極移動(dòng)的現(xiàn)象。
3、層析(色譜):用不同物質(zhì)在不同相態(tài)的選擇性分配,以流動(dòng)相對(duì)固定相中的混合物進(jìn)行洗脫,使混合物各組分以不同速度移動(dòng),從而達(dá)到分離的一種物理方法。
4、酶的活力單位:是指在特定條件下(25℃、最適的pH值和底物濃度),每分鐘可催化1微摩爾(10-6摩爾)底物轉(zhuǎn)化所需要的酶量。
5、比活力:代表酶制劑的純度。根據(jù)國(guó)際酶學(xué)委員會(huì)規(guī)定比活力用每毫克蛋白所含的酶活力單位數(shù)表示。
6、分子篩效應(yīng):凝膠本身具有三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),大的分子在通過(guò)這種網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)上的孔隙時(shí)阻力較大,小分子通過(guò)時(shí)阻力較小。分子量大小不同的多種成份在通過(guò)凝膠床時(shí),按照分子量大小“排隊(duì),凝膠表現(xiàn)分子篩效應(yīng)。
7、電泳的原理:電泳是指帶電顆粒在電場(chǎng)的作用下發(fā)生遷移的過(guò)程。許多重要的生物分子,如氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、核苷酸、核酸等都具有可電離基團(tuán),它們?cè)谀硞(gè)特定的pH值下可以帶正電或負(fù)電,在電場(chǎng)的作用下,這些帶電分子會(huì)向著與其所帶電荷極性相反的電極方向移動(dòng)。電泳技術(shù)就是利用在電場(chǎng)的作用下,由于待分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)以及分子本身大小、形狀等性質(zhì)的差異,使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度,從而對(duì)樣品進(jìn)行分離、鑒定或提純的技術(shù)。
8、離子交換層析的原理:離子交換層析法是以具有離子交換性能的物質(zhì)作固定相,利用它與流動(dòng)相中的離子能進(jìn)行可逆的交換性質(zhì)來(lái)分離離子型化合物的一種方法。
9、親和層析的原理:親和層析是應(yīng)用生物高分子與配基可逆結(jié)合的原理,將配基通過(guò)共價(jià)鍵牢固結(jié)合于載體上而制得的層析系統(tǒng)。這種可逆結(jié)合的作用主要是靠生物高分子對(duì)它的配基的空間結(jié)構(gòu)的識(shí)別。
10、凝膠過(guò)濾層析的原理:一種利用帶孔凝膠珠作基質(zhì),按照分子大小分離蛋白質(zhì)或其它分子混合物的層析技術(shù)。凝膠過(guò)濾層析具有分子篩效應(yīng)。
11、吸附層析的原理:組份在吸附劑表面吸附固定相是固體吸附劑,各能力不同而進(jìn)行分離的方法。
12、透析技術(shù)的基本原理及其應(yīng)用:
13、聚丙烯酰胺凝膠電泳的主要優(yōu)點(diǎn)及用途:①聚丙烯酰胺凝膠是由丙烯酰胺和N,N'甲叉雙丙烯酰胺聚合而成的大分子。凝膠有 格子是帶有酰胺側(cè)鏈的碳-碳聚合物,沒(méi)有或很少帶有離子的側(cè)基,因而電滲作用比較小,不易和樣品相互作用。
、谟捎诰郾0纺z是一種人工合成的物質(zhì),在聚合前可調(diào)節(jié)單體的濃度比,形成 不同程度交鏈結(jié)構(gòu),其空隙度可在一個(gè)較廣的范圍內(nèi)變化,可以根據(jù)要分離物質(zhì)分子 的大小,選擇合適的凝膠成分,使之既有適宜的空隙度,又有比較好的機(jī)械性質(zhì)。一 般說(shuō)來(lái),含丙烯酰胺7-7.5%的凝膠,機(jī)械性能適用于分離分子量范圍不1萬(wàn)至100萬(wàn)物 質(zhì),1萬(wàn)以下的蛋白質(zhì)則采用含丙烯酰胺15-30%的凝膠,而分子量特別大的可采
用含 丙烯酰胺4%的凝膠,大孔膠易碎,小孔膠則難從管中取出,因此當(dāng)丙烯酰胺的濃度增 加時(shí)可以減少雙含丙烯酰胺,以改進(jìn)凝膠的機(jī)械性能。
、墼谝欢舛确秶郾0穼(duì)熱穩(wěn)定。凝膠無(wú)色透明,易觀察,可用檢測(cè)儀直接測(cè)定。
④丙烯酰胺是比較純的化合物,可以精制,減少污染。合成聚丙烯酰胺凝膠的原料是丙烯酰胺和甲撐雙丙烯酰胺。丙烯酰胺稱單體,甲撐雙 丙烯酰胺稱交聯(lián)劑,在水溶液中,單體和交聯(lián)劑通過(guò)自由基引發(fā)的聚合反應(yīng)形成凝膠。
14、按層析過(guò)程的機(jī)理,層析法分哪幾類(lèi)?按操作形式不同又分哪三類(lèi)?:根據(jù)分離的原理不同分類(lèi),層析主要可以分為吸附層析、分配層析、凝膠過(guò)濾層析、離子交換層析、親和層析等。按操作形式不同又分層析可以分為紙層析、薄層層析和柱層析。
15、普通離心機(jī)的使用注意事項(xiàng)?:
(1).離心機(jī)要置水平位置,以保證旋轉(zhuǎn)軸垂直地球水平面。
(2).使用前應(yīng)檢查套環(huán)是否平衡(臺(tái)稱)。
(3).離心杯及其外套(離心管套)是否平衡(臺(tái)稱)。
(4).樣品傾入離心杯后應(yīng)與離心管套一起兩兩平衡,平衡后把它們放置于轉(zhuǎn)子的對(duì)稱位置。
(5).蓋好蓋子,打開(kāi)電源開(kāi)關(guān),調(diào)整離心時(shí)間。
(6).啟動(dòng)離心時(shí)轉(zhuǎn)速應(yīng)由小至大,緩慢升速(一般要2~3min)。
(7).達(dá)到預(yù)定轉(zhuǎn)速后再調(diào)整離心時(shí)間至預(yù)定時(shí)間(10min)。
(8).離心完成后要調(diào)整調(diào)速連桿至零位,同時(shí)關(guān)上電源。
(9).要等到轉(zhuǎn)速為零時(shí)才能打開(kāi)離心機(jī)蓋,取出樣品。
16、可見(jiàn)分光光度計(jì)的使用注意事項(xiàng)?:(1) 使用過(guò)程中比色皿的四個(gè)面在槽中保持一定的位置,取用比色皿時(shí)手應(yīng)該捏住四個(gè)棱而不能碰到面。比色皿應(yīng)該避免磨損透光面。
(2) 使用過(guò)程中不得打開(kāi)蓋子,保持儀器清潔,為避免溶液灑落對(duì)儀器造成的腐蝕,所有溶液的配置、傾倒都不要在儀器附近操作。比色皿放進(jìn)樣品池之前必須把外表面擦干。
(3)當(dāng)(僅當(dāng))操作者錯(cuò)誤操作或其他干擾引起微機(jī)錯(cuò)誤時(shí),應(yīng)該立即關(guān)斷主機(jī)電源,重新啟動(dòng),但無(wú)須關(guān)斷燈源電源。
。4)光學(xué)器件和儀器運(yùn)行環(huán)境需保護(hù)清潔。清潔儀器外表時(shí) ,請(qǐng)勿使用乙醇乙醚等 有機(jī)溶劑,請(qǐng)勿在工作中清潔,不使用時(shí)請(qǐng)加防塵罩。
17、蛋白質(zhì)含量測(cè)定的常用方法有那些?:(1)微量凱式定氮法。(2)雙縮脲法。(3)folin-酚試劑法。(4)紫外分光光度法。(5)考馬斯亮藍(lán)染色法。
18、粗脂肪的提取和含量測(cè)定的基本原理。:脂肪是丙三醇(甘油)和脂肪酸結(jié)合成的脂類(lèi)化合物, 能溶于脂溶性有機(jī)溶劑。本實(shí)驗(yàn)用重量法,利用脂肪能溶于脂溶性溶劑這一特性,用脂溶性溶劑將脂肪提取出來(lái),借蒸發(fā)除去溶劑后稱量。整個(gè)提取過(guò)程均在索氏提取器中進(jìn)行。通常使用的脂溶性溶劑為乙醚或沸點(diǎn)為30oC -60 oC的石油醚。用此法提取的脂溶性物質(zhì)除脂肪外,還含有游離脂肪酸、磷酸、固醇、芳香油及某些色素等,故稱為“粗脂肪”。
19、索氏提取器是由哪幾部分組成的?:提取瓶,提取管和冷凝管三部分組成。
20、粗脂肪的提取和含量測(cè)定的簡(jiǎn)要操作步驟(6分):1.抽提瓶在105℃±2℃烘箱中烘至恒重,材料干燥至恒重。
2.稱取干燥后的材料1-2g,放入研缽中研磨(越細(xì)越好)將研磨好的材料用脫脂濾紙包住,用少許脫脂棉擦拭研缽壁上粘的材料及油脂,也一并放入濾紙包. 用棉線拴住濾紙包,將濾紙包放入抽提管,在抽提瓶中加入2/3體積的無(wú)水乙醚在70-75℃的水浴上加熱,使乙醚回流,控制乙醚回流次數(shù)為每小時(shí)約10次,共回流約50次,或檢查抽提管流出的乙醚揮發(fā)后不留
下油跡為抽提終點(diǎn)。
3 取出試樣,仍用原提取器回收乙醚直至抽提瓶全部吸完,擦凈瓶外壁,將抽提瓶放入105℃±2℃烘箱中烘干至恒重。
21、粗脂肪的提取實(shí)驗(yàn)中如何減少誤差?(6分):(1)材料和提取瓶充分干燥。(2)材料盡可能的不損失。(3)提取充分完全。(4)提取后瓶子還要充分的干燥。
22、凱氏定氮法測(cè)定總氮量的基本原理(6分):樣品與濃硫酸共熱,含氮有機(jī)物即分解產(chǎn)生氨,氨又與硫酸作用變成硫氨.經(jīng)強(qiáng)堿堿化使之分解放出氨,借蒸汽將氨蒸至酸液中,根據(jù)此酸液 被中和的程度可計(jì)算得樣品氮的含量.以甘氨酸為例:
1.有機(jī)物中的氮在強(qiáng)熱和CuSO4,濃H2SO4 作用下,消化生成(NH4)2SO4
反應(yīng)式為: H2SO4==SO2+H2O+[O]
R. CH.COOH+[O]==R.CO.COOH+NH3
NH3
R.CO.COOH+[O]==nCO2+mH2O
2NH3+H2SO4==(NH4)2SO4
2.在凱氏定氮器中與堿作用,通過(guò)蒸餾釋放出NH3 ,收集于 H3BO3 溶液中。
反應(yīng)式為:2NH4++OH-==NH3+H2O
NH3+H3BO3==NH4++H2BO3-
3. 再用已知濃度的HCI標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定,根據(jù)HCI消耗的量計(jì)算出氮的含量,然
后乘以相應(yīng)的換算因子,既得蛋白質(zhì)的含量。
23、凱氏定氮實(shí)驗(yàn)中用到的主要器材有哪些?(6分):凱氏燒瓶 ,容量瓶
凱氏定氮裝置移液管 酸式滴定管 分析天平 電爐 烘箱
24、核酸的含量測(cè)定常用的方法有哪些?(6分)(1)紫外分光光度法;
。2)定磷法:鉬藍(lán)比色法
。3)定糖法:
RNA+鹽酸——糠醛+地衣酚——A670,鮮綠色;
DNA+二苯胺——A595,藍(lán)色化合物
。4)瓊脂糖凝膠電泳法
25、雙倒數(shù)法測(cè)定米氏常數(shù)的基本原理(6分): Lineweaver和Burk將米氏方程改寫(xiě)成倒數(shù)形式:
26、雙倒數(shù)法測(cè)定米氏常數(shù)的實(shí)驗(yàn)中,決定實(shí)驗(yàn)成敗的因素有哪些?關(guān)鍵因素是什么?(7分)
27、生物細(xì)胞的破碎的常用方法有哪些?6分):機(jī)械法:研磨,高速搗碎機(jī);物理法:反復(fù)凍溶,超聲波破碎,壓榨法;化學(xué)雨生物化學(xué)法:自溶,溶脹法,酶解法,有機(jī)溶劑處理。
28、酶的制備及提取過(guò)程中常注意哪些事項(xiàng)?(6分):
29、蛋白質(zhì)的分離常用的方法有哪些?(6分):1、前處理:選擇適當(dāng)?shù)钠扑榧?xì)胞的方法破碎細(xì)胞,組織細(xì)胞破碎后,選擇適當(dāng)?shù)慕橘|(zhì)(一般用緩沖液)把所要的蛋白質(zhì)提取出來(lái)。2、粗分離:當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)混合物提取液獲得后,選用一套適當(dāng)?shù)姆椒,將所要的蛋白質(zhì)與其他雜蛋白質(zhì)分離開(kāi)來(lái)。一般這一步的分級(jí)用鹽析、等電點(diǎn)沉淀和有機(jī)溶劑分級(jí)分離等方法。這種方法的特點(diǎn)是簡(jiǎn)便、處理量大,既能除去大量雜質(zhì),又能濃縮蛋白質(zhì)溶液。
3、細(xì)分離:也就是樣品的進(jìn)一步提純,一般使用層析法,包括凝膠過(guò)濾層析,離子交換層析,吸附層析以及親和層析等。必要時(shí)還可以選擇電泳法。
30、甲醛滴定法測(cè)定氨基酸的基本原理(6分):
31、為什么SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳可以用來(lái)測(cè)定未知蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量?(6分):在聚丙烯酰胺凝膠系統(tǒng)中,加入一定量的十二烷基硫酸鈉(SDS),形成蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物,這種復(fù)合物由于結(jié)合了大量的SDS,使蛋白質(zhì)喪失了原有的電荷狀態(tài),形成了僅保持原有分子大小為特征的負(fù)離子團(tuán)塊,從而降低或消除了各種蛋白質(zhì)分子之間的天然的電荷差異,此時(shí),蛋白質(zhì)分子的電泳遷移率主要取決于它的分子量大小,而其它因素對(duì)電泳遷移率的影響幾乎可以忽略不計(jì)。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)的分子量在15000~200000之間時(shí),電泳遷移率與分子量的對(duì)數(shù)值呈直線關(guān)系,符合下列方程:
㏒10Mr = -b·mR + K
32、連續(xù)聚丙烯酰胺凝膠電泳與不連續(xù)聚丙烯酰胺凝膠電泳有什么不同?(6分):不連續(xù)聚丙烯酰胺凝膠電泳包含了兩種以上的緩沖液成分、pH值和凝膠孔徑,而且在電泳過(guò)程中形成的電位梯度亦不均勻。由此產(chǎn)生的濃縮效應(yīng)、電荷效應(yīng)和分子篩效應(yīng)。
33、聚丙烯酰胺凝膠電泳的優(yōu)點(diǎn)?(6分):①聚丙烯酰胺凝膠是由丙烯酰胺和N,N'甲叉雙丙烯酰胺聚合而成的大分子。凝膠有 格子是帶有酰胺側(cè)鏈的碳-碳聚合物,沒(méi)有或很少帶有離子的側(cè)基,因而電滲作用比較小,不易和樣品相互作用。
、谟捎诰郾0纺z是一種人工合成的物質(zhì),在聚合前可調(diào)節(jié)單體的濃度比,形成 不同程度交鏈結(jié)構(gòu),其空隙度可在一個(gè)較廣的范圍內(nèi)變化,可以根據(jù)要分離物質(zhì)分子 的大小,選擇合適的凝膠成分,使之既有適宜的空隙度,又有比較好的機(jī)械性質(zhì)。一 般說(shuō)來(lái),含丙烯酰胺7-7.5%的凝膠,機(jī)械性能適用于分離分子量范圍不1萬(wàn)至100萬(wàn)物 質(zhì),1萬(wàn)以下的蛋白質(zhì)則采用含丙烯酰胺15-30%的凝膠,而分子量特別大的可采用含 丙烯酰胺4%的凝膠,大孔膠易碎,小孔膠則難從管中取出,因此當(dāng)丙烯酰胺的濃度增 加時(shí)可以減少雙含丙烯酰胺,以改進(jìn)凝膠的機(jī)械性能。
③在一定濃度范圍聚丙烯酰胺對(duì)熱穩(wěn)定。凝膠無(wú)色透明,易觀察,可用檢測(cè)儀直接測(cè)定。 ④丙烯酰胺是比較純的化合物,可以精制,減少污染。合成聚丙烯酰胺凝膠的原料是丙烯酰胺和甲撐雙丙烯酰胺。丙烯酰胺稱單體,甲撐雙 丙烯酰胺稱交聯(lián)劑,在水溶液中,單體和交聯(lián)劑通過(guò)自由基引發(fā)的聚合反應(yīng)形成凝 膠。
34、瓊脂糖凝膠電泳的優(yōu)點(diǎn)?(6分):(1)瓊脂含液體量 大,可達(dá)98-99%,近似自由電泳,但是樣品的擴(kuò)散度比自由電泳小,對(duì)蛋白質(zhì)的吸附 極微。(2)瓊脂作為支持體有均勻,區(qū)帶整齊,分辨率高,重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)。(3) 電泳速度快。(4)透明而不吸收紫外線,可以直接用紫外檢測(cè)儀作定量測(cè)定。(5) 區(qū)帶易染色,樣品易回收,有利于制止備。然而瓊脂中有較多硫酸根,電滲作用大。 瓊脂糖是從瓊脂中提取出來(lái)的,是由半乳糖和3.6-脫水-L- 半乳糖相互結(jié)合的鏈狀多 糖。含硫酸根比瓊脂少,因而分離效果明顯提高。瓊脂(糖)電泳常用緩沖液的pH在6-9之間,離子強(qiáng)度為0.02-0.05。離子強(qiáng)度過(guò) 高時(shí),會(huì)有大量電流通過(guò)凝膠,因而產(chǎn)生熱量,使凝膠的水份量蒸發(fā),析出鹽的結(jié) 晶,甚至可使凝膠斷裂,
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