寄生線蟲遺傳多樣性的分子研究成果探析論文
生物多樣性包括遺傳多樣性、 物種多樣性、 生態(tài)系統(tǒng)多樣性和景觀多樣性。 在生物多樣性這四個(gè)層次中， 遺傳多樣性是核心內(nèi)容和生物進(jìn)化的基礎(chǔ)。 遺傳多樣性是指同一物種內(nèi)不同種群間或同一種群內(nèi)不同個(gè)體間的遺傳變異的總和[1], 在 種群間或種群內(nèi)主要表現(xiàn)為分子、 細(xì)胞和個(gè)體三個(gè)水平上的遺傳變異[2]. 通 常來說 , 遺傳變異程度的高低是反映遺傳多樣性大小的最直接表達(dá)形式。 在自然界中， 種群是生物進(jìn)化的基本單位， 種群遺傳結(jié)構(gòu)的差異也反映著遺傳多樣性的程度， 所以遺傳變異的大小和種群遺傳結(jié)構(gòu)的差異同時(shí)決定著一個(gè)物種的進(jìn)化潛力和對(duì)不良環(huán)境的抵抗能力[3].
遺傳多樣性的研究有著重要的價(jià)值， 可以為物種的進(jìn)化提供理論支持， 加深人們對(duì)生物起源的認(rèn)識(shí)， 同時(shí)為保護(hù)現(xiàn)有資源提供背景資料[4]. 對(duì) 于寄生線蟲來說， 每年由寄生線蟲引起的疾病， 給家畜的健康和畜牧業(yè)的發(fā)展帶來嚴(yán)重的危害， 這使得人們的研究不斷深入， 從最初對(duì)寄生線蟲的形態(tài)學(xué)、系統(tǒng)分類學(xué)和生態(tài)學(xué)特征等方面的描述， 逐漸發(fā)展到遺傳特性、 分子進(jìn)化以及基因功能等方面的研究[ 5].
寄生線蟲種群遺傳學(xué)的研究可以在種群間或種群內(nèi)進(jìn)行， 遺傳多樣性依賴于堿基的突變率、 種群的有效大小和種群的遷移率等[6]. 遺傳多樣性的研究對(duì)了解寄生線蟲的流行方式、 抗藥性等位基因的擴(kuò)散以及疾病的防控有著重要的意義。
1寄生線蟲遺傳多樣性的分子研究方法
遺傳多樣性的研究方法從傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)標(biāo)記、染色體標(biāo)記和生化標(biāo)記逐步發(fā)展到DNA分子標(biāo)記。DNA是遺傳物質(zhì)的載體 , 遺 傳信息就是DNA的 堿基排序， 直接對(duì)DNA堿基序列的分析和比較是揭示遺傳多樣性的最理想方法。 與其他標(biāo)記相比， DNA分子標(biāo)記不受發(fā)育階段和組織特異性的影響， 多態(tài)信息含量豐富， 現(xiàn)已被廣泛應(yīng)用到系統(tǒng)發(fā)育、 基因定位和遺傳育種等研究中[7]. 此 外 , DNA分 子標(biāo)記應(yīng)用于研究種群遺傳多樣性時(shí)， 不需要大量的表型遺傳基礎(chǔ)作為背景資料， 為加快寄生線蟲的分子生物學(xué)研究、 診斷分析和潛在疫苗的特征描述提供了技術(shù)保障。
1.1 限 制 性 片段 長(zhǎng) 度 多 態(tài) 性 （ restriction fragmentlength polymorphism, RFLP） RFLP 標(biāo)記是以分子雜交為核心的第1代分子標(biāo)記技術(shù)。 其基本原理是基因組DNA上的特定核苷酸序列可被限制性內(nèi)切酶識(shí)別并切割， 然后與探針結(jié)合進(jìn)行Southern雜交，通過放射顯影的方法觀察所獲得的特異性RFLP圖譜[8]. 這 種分子標(biāo)記的出現(xiàn) , 使得種群遺傳學(xué)的發(fā)展向前跨越了一大步， 但是同位素標(biāo)記的使用存在一定的放射性污染， 對(duì)于不同發(fā)育階段的個(gè)體差異分析， 敏感性不高。隨著PCR技術(shù)的建立， RFLP常與PCR技術(shù)相結(jié)合應(yīng)用于種群遺傳多樣性的分析中， 既克服了上述方法的局限性， 也省去了酶切和雜交等繁瑣的操作過程， 并且僅需少量的DNA模板[9]. PCR-RFLP的.原理是將擴(kuò)增的PCR產(chǎn)物使用特異性的限制性內(nèi)切酶切割成大小不同的片段， 再利用凝膠電泳分辨其差異性。
1.2 隨 機(jī) 擴(kuò) 增 多 態(tài) 性 DNA （ random amplifiedpolymorphic DNA, RAPD） RAPD 技 術(shù) 最 早 出 現(xiàn)于20世紀(jì)90年代， 是以PCR為核心的第2代分子標(biāo)記技術(shù)。 使用該分子標(biāo)記時(shí)不需要了解研究對(duì)象的DNA序 列信息 , 利用10個(gè)核苷酸的隨機(jī)寡核苷酸序列作為引物， 對(duì)基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增， 根據(jù)凝膠電泳顯示的若干大小不一片段分析該物種的多態(tài)性[ 10,11]. 應(yīng) 用 RAPD 分子標(biāo)記時(shí)所需 DNA 的 量少 ,操作簡(jiǎn)易， 檢測(cè)速度快， 可以檢測(cè)出RFLP標(biāo)記不能檢測(cè)的重復(fù)序列區(qū)， 填補(bǔ)RFLP圖譜的空缺， 但是該分子標(biāo)記重復(fù)性和特異性比較差[12].
1.3 聚 合 酶 鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-單 鏈構(gòu) 象 多 態(tài) 性 （polymerasechain reaction-single strand conformation polymorphism,PCR-SSCP） PCR-SSCP 標(biāo) 記 是 將 PCR 和 DNA 單 鏈構(gòu)象多態(tài)性結(jié)合的第2代分子標(biāo)記技術(shù)。 其原理是將 擴(kuò) 增 得 到 的 DNA 雙 鏈 產(chǎn) 物 變 性 處 理 成 單 鏈 的DNA, 在非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳中 , 根據(jù)電泳遷移率的不同， 觀察單鏈DNA構(gòu)象的差異， 反映出物種的多態(tài)性[ 13]. 傳 統(tǒng)的 SSCP 分 析采用平板凝膠電泳， 這不僅費(fèi)時(shí)費(fèi)力， 還不能滿足大量篩選突變基因的需要。 有研究者將毛細(xì)管電泳與SSCP結(jié)合替代了平板凝膠電泳[14], CE-SSCP標(biāo) 記具有分離效率高、 分析速度快、 樣品用量少等特點(diǎn)， 20世紀(jì)80年代， CE-SSCP標(biāo)記得到廣泛應(yīng)用。
1.4 擴(kuò) 增 性 長(zhǎng) 度 片段 多 態(tài) 性 （ amplified fragmentlength polymorphism, AFLP） AFLP標(biāo) 記也是第2代分子標(biāo)記技術(shù)的一種， 與RFLP標(biāo)記不同的是該標(biāo)記需要兩種限制性內(nèi)切酶切割基因組DNA, 酶切片段的5′端在T4連接酶的作用下與帶有兩種內(nèi)切酶黏性末端的接頭序列連接， 接頭序列是由核心序列和內(nèi)切酶識(shí)別序列兩部分組成， 接頭序列與引物3′端選擇性堿基識(shí)別， 對(duì)特異性片段進(jìn)行預(yù)擴(kuò)增和選擇性擴(kuò)增， 在變性的聚丙烯酰胺凝膠電泳上檢測(cè)PCR產(chǎn)物， 尋找多態(tài)性片段[15]. AFLP 標(biāo) 記兼具了 RFLP和RAPD兩種標(biāo)記的優(yōu)點(diǎn)， 但是操作比較復(fù)雜， 花費(fèi)較高。
1.5 微衛(wèi)星DNA （microsatellite DNA, SSR） 微 衛(wèi)星DNA 又 被 稱 為 簡(jiǎn) 單 重 復(fù) 序 列 （ simple sequencerepeat, SSR） 或者短串聯(lián)重復(fù)序列 （ short tandemrepeat, STR） , 廣泛且隨機(jī)地分布在真核生物的基因組中[16], 是 由1~6個(gè)核苷酸為重復(fù)單元組成的串聯(lián)重復(fù)序列。 微衛(wèi)星DNA呈現(xiàn)出的高度多態(tài)性以自身重復(fù)單位數(shù)的差異為基礎(chǔ)， 在DNA復(fù)制過程中出現(xiàn)滑鏈現(xiàn)象， 使重復(fù)序列之間發(fā)生了插入和缺失等變化， 出現(xiàn)了大量的不同的等位基因從而引起了微衛(wèi)星DNA的高度多態(tài)性[17,18]. 微 衛(wèi)星DNA 是 由核心序列與其兩端的側(cè)翼序列組成的， 根據(jù)兩端保守的側(cè)翼序列設(shè)計(jì)PCR反應(yīng)的引物， 擴(kuò)增出微衛(wèi)星片段， 用于遺傳多樣性的分析。 目前， 微衛(wèi)星DNA被廣泛應(yīng)用于種群遺傳結(jié)構(gòu)分析、 構(gòu)建遺傳圖譜、 親子鑒定和QTL定位等研究中。
1.6 線 粒 體DNA （mitochondrial DNA） 寄 生線蟲的線粒體基因組與后生動(dòng)物的線粒體基因組相似，也呈環(huán)形， 基因組大小在12~26 kb. 目前大約有110 種線蟲的線粒體基因組全部完 成測(cè)序和分析 .線粒體基因組包括12~13個(gè)編碼基因， 分別是煙酰胺脫氫酶亞單位1~6和4L基因、 細(xì)胞色素氧化酶亞單位1~3和b基因、 ATP酶亞單位6或8基因 [除旋毛蟲 （Trichinella spiralis） 外， 大部分線蟲的線粒體基因組不包括ATP酶亞單位8基因], 還包括tRNA基因和rRNA基因[19]. 線粒體基因組獨(dú)立存在于細(xì)胞核外， 與核基因組相比進(jìn)化速率快， 有母系遺傳特征并且能夠穩(wěn)定遺傳[20], 常被應(yīng)用在種群遺傳學(xué)的研究中， 尤其是相對(duì)保守的cox1和nad4基因應(yīng)用廣泛。
1.7 DNA 分 子 標(biāo) 記 方 法特 征 的 比較 DNA 分 子標(biāo)記可以分為兩大類型， I型是與分子標(biāo)記相關(guān)聯(lián)的基因的功能是已知的， II型是與分子標(biāo)記相關(guān)聯(lián)的基因功能是未知的[21]. DNA分子標(biāo)記被廣泛應(yīng)用于種群的遺傳學(xué)分析中， 每種標(biāo)記都有自身的優(yōu)點(diǎn)和局限性， 常用的分子標(biāo)記特點(diǎn)見表1.
2寄生線蟲遺傳多樣性的研究現(xiàn)狀
2.1 捻 轉(zhuǎn) 血 矛線 蟲 （ Haemonchus contortus） 線粒體DNA屬于核外基因， 并且具有進(jìn)化速率快、 母系遺傳等優(yōu)點(diǎn)， 因此常被選作遺傳標(biāo)記應(yīng)用于捻轉(zhuǎn)血矛線蟲遺傳多樣性的研究中。 國(guó)內(nèi)外均有報(bào)道，以線粒體nad4基因作為遺傳標(biāo)記， 對(duì)寄生在牛羊體內(nèi)的捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的種群遺傳結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析， 包括美國(guó)、 希臘、 德國(guó)、 瑞典、 澳大利亞、 印度尼西亞、 柬埔寨、 馬來西亞、 也門、 巴西、 中國(guó)和巴基斯坦等地區(qū)[22-27]. 這些研究均表明 , 捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的遺傳變異大部分來自種群內(nèi)部。 其次， 從全球范圍來看， 來自距離相近的國(guó)家或同域的種群， 種群間基因流動(dòng)高， 導(dǎo)致種群間遺傳分化程度不高； 而對(duì)于不同地理起源的種群來說， 受地理隔離的影響， 種群間基因流動(dòng)有一定的阻礙， 使得種群間的遺傳分化程度相對(duì)較高。 而以同樣基因作為遺傳標(biāo)記分析寄生在野生動(dòng)物體內(nèi)的捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的種群遺傳結(jié)構(gòu)時(shí)， 發(fā)現(xiàn)種群內(nèi)部也表現(xiàn)出較高的遺傳變異[28].
國(guó)外研究者對(duì)捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的微衛(wèi)星DNA的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)也進(jìn)行了研究， 結(jié)果發(fā)現(xiàn)捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的微衛(wèi)星位點(diǎn)不屬于完美型， 但捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的微衛(wèi)星標(biāo)記的多態(tài)性比較豐富， 可作為遺傳標(biāo)記用于種群遺傳結(jié)構(gòu)分析[29,30]. 利 用8個(gè) 微衛(wèi)星位點(diǎn)分析捻轉(zhuǎn)血矛線蟲成蟲和3期幼蟲的遺傳多樣性， 結(jié)果表明，在對(duì)大量的幼蟲DNA樣品進(jìn)行遺傳學(xué)研究以及實(shí)驗(yàn)室株和野生株之間的遺傳關(guān)系分析上， 微衛(wèi)星標(biāo)記是一種簡(jiǎn)便而又快速的手段[31]. 以11個(gè) 微衛(wèi)星位點(diǎn)作為遺傳標(biāo)記， 分析澳大利亞不同氣候和地理位置的捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的種群遺傳結(jié)構(gòu)， 結(jié)果表明來自澳大利亞不同地理位置的種群表現(xiàn)出明顯的遺傳差異， 同時(shí)也觀察到蟲體表型上的差異[32].
2.2 毛 圓線 蟲 Grant等[33]在1994年借助RFLP分子雜交技術(shù)， 使用簡(jiǎn)單非重復(fù)性的探針對(duì)蛇形毛圓線蟲 （Trichostrongylus colubriformis） 的種群間和種群內(nèi)的遺傳關(guān)系進(jìn)行了分析， 同時(shí)比較了蛇形毛圓線蟲的實(shí)驗(yàn)室株和野生株之間的遺傳差異。 研究發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室株的多態(tài)性并不少于野生株， 說明在相對(duì)規(guī)模小的種群內(nèi)也能維持足夠的多態(tài)性。PCR-RFLP 標(biāo)記也可應(yīng)用于寄生線蟲種類的鑒定， 利用該技術(shù)鑒別來自山羊、 綿羊、 牛和豬體內(nèi)的 24 種 毛 圓 線 蟲 , 對(duì) 核 糖 體 DNA 內(nèi) 轉(zhuǎn) 錄 間 隔 區(qū)（ITS） 的PCR-RFLP分 析結(jié)果表明 , ITS-1和ITS-2是鑒別寄生線蟲種類的特異性遺傳標(biāo)記[34].以RAPD作為種類特異性的標(biāo)記對(duì)毛圓線蟲進(jìn)行鑒定， 但是這些寄生線蟲的種內(nèi)高度變異使得鑒定結(jié)果不可靠， 需要同時(shí)結(jié)合生態(tài)學(xué)和形態(tài)學(xué)一起進(jìn)行種類上的鑒別[35].
2.3 肺線 蟲 利用線粒體 cox1 基因分析瑞典胎生肺線蟲 （Dictyocaulus viviparus） 的種群遺傳結(jié)構(gòu)，數(shù)據(jù)分析后共得到12個(gè)單倍體， 單倍型多態(tài)性和核苷酸多態(tài)性分別是0.160和0.002, 不同地理起源的12個(gè)單倍體聚類分析 沒有發(fā)現(xiàn)明顯的遺傳結(jié)構(gòu) , 分析結(jié)果表明牛肺線蟲的種群內(nèi)部遺傳差異較小， 并且種群間的基因流動(dòng)也較低[36].利用AFLP標(biāo)記對(duì)來自瑞典的胎生肺線蟲的8個(gè)野生株和1個(gè)實(shí)驗(yàn)室株的種群遺傳結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析，結(jié)果顯示種群內(nèi)的雜合體較少， 這可能與種群的突變率和遷移率保持平衡有關(guān)。 從AFLP圖譜上可發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室株與野生株的種群遺傳結(jié)構(gòu)有所不同。 將野生株和實(shí)驗(yàn)室株作為一個(gè)整體時(shí)， 分析結(jié)果顯示有50%的變異發(fā)生在種群內(nèi)部。 而8個(gè)野生株單獨(dú)分析時(shí)， 發(fā)現(xiàn)有60%的變異發(fā)生在種群內(nèi)部[37].應(yīng)用mtDNA （cox3、 nad5、 rrnL、 trna） 和AFLP兩種分子標(biāo)記對(duì)同樣的8個(gè)野生株和1個(gè)實(shí)驗(yàn)室株進(jìn)行種群遺傳結(jié)構(gòu)研究， 發(fā)現(xiàn)這8個(gè)野生株中至少存在3個(gè)亞種群結(jié)構(gòu)， 其中有1個(gè)占主導(dǎo)地位。 在這個(gè)占主導(dǎo)地位的種群中又分化出兩個(gè)較小的遺傳組群， 該分析結(jié)果意味著這些牛肺線蟲有著多重的來源[38].
2.4 環(huán) 背帶線 蟲 （Teladorsagia circumcincta） 使用線粒體nad4基因研究來自法國(guó)和摩洛哥的11個(gè)環(huán)背帶線蟲種群的遺傳結(jié)構(gòu)， 結(jié)果顯示所有的種群都呈現(xiàn)高度的核苷酸多態(tài)性， 在小規(guī)模的地理范圍內(nèi)（小于200 km） 種群沒有發(fā)生遺傳亞分化 , 在 大規(guī)模的地理范圍內(nèi)FST值比較顯著， 但種群之間的遺傳差異不明顯[39].由于環(huán)背帶線蟲的種群遺傳學(xué)信息較少， 限制了對(duì)藥物抗藥性的研究， Grillo等[40]在2006年通過環(huán)背帶線蟲的EST數(shù)據(jù)庫(kù)篩選了7個(gè)多態(tài)性豐富、 穩(wěn)定性好、 擴(kuò)增效率高的微衛(wèi)星位點(diǎn)用于種群遺傳學(xué)的研究。 以5對(duì)微衛(wèi)星標(biāo)記分析環(huán)背帶線蟲的9個(gè)野生株和3個(gè)實(shí)驗(yàn)室株的種群內(nèi)和種群間的遺傳關(guān)系，結(jié)果顯示所有的種群均在種群內(nèi)部表現(xiàn)出了高度的遺傳變異。 對(duì)于來自英國(guó)不同地理起源的野生株和實(shí)驗(yàn)室株的種群沒有檢測(cè)到遺傳差異； 而來自法國(guó)野生株的4個(gè)種群和來自新西蘭實(shí)驗(yàn)室株的1個(gè)種群在種群間表現(xiàn)出明顯的遺傳差異。 最后分析結(jié)果表明寄生在山羊體內(nèi)的環(huán)背帶線蟲不是單一的蟲種，有可能存在隱藏種[41].
2.5 鉤 蟲 將 PCR-SSCP 標(biāo) 記與 DNA 測(cè) 序相結(jié)合研究犬鉤蟲 （Ancylostoma caninum）、 十二指腸鉤蟲（ Ancylostoma duodenale） 和 美 洲 鉤 蟲 （ Necatoramericanus） 的群體遺傳結(jié)構(gòu) , 結(jié)果表明在犬鉤蟲和十二指腸鉤蟲中存在著亞種結(jié)構(gòu)， 來自中國(guó)和多哥的美洲鉤蟲有4個(gè)不同的核苷酸固定位點(diǎn)變異，暗示美洲鉤蟲是一個(gè)復(fù)雜的種群， 這些發(fā)現(xiàn)說明鉤蟲的種群遺傳學(xué)研究有著重要的流行病學(xué)意義[42 ].以線粒體cox1基因?yàn)檫z傳標(biāo)記， 對(duì)寄生在人、狗和貓?bào)w內(nèi)的鉤蟲的遺傳特征進(jìn)行研究， 系統(tǒng)發(fā)育分析發(fā)現(xiàn)不同宿主體內(nèi)的鉤蟲分成兩個(gè)聚類群， 其中一簇包括寄生在人體內(nèi)的3個(gè)隔離株， 另一簇由寄生在人和動(dòng)物體內(nèi)的19個(gè)隔離株組成。 進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)兩個(gè)聚類群的鉤蟲的核苷酸序列有5個(gè)堿基的差異， 這些發(fā)現(xiàn)意味著不同宿主體內(nèi)的鉤蟲可能存在相似的單倍型[43]. 以同樣的遺傳標(biāo)記對(duì)寄生在澳洲海獅 （Neophoca cinerea） 體內(nèi)的鉤蟲進(jìn)行種群遺傳結(jié)構(gòu)分析， 研究發(fā)現(xiàn)種群間基因流動(dòng)高， 遺傳分化程度較低， 反駁了由于地理隔離阻礙了鉤蟲基因流動(dòng)的假設(shè)[44].
2.6 鼠 類 圓 線 蟲 利用PCR-RFLP標(biāo)記對(duì)來自英國(guó)和德國(guó)的鼠類圓線蟲 （Strongyloides ratti） （寄生在野生鼠體內(nèi)） 種群遺傳結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析， 分析表明來自宿主體內(nèi)不同個(gè)體間的差異為73.3%, 同一采樣地點(diǎn)不同種群間的差異為25.3%, 不同采樣地點(diǎn)之間的樣品遺傳差異很小， 為1.4%, 得到的數(shù)據(jù)說明鼠類圓線蟲的種群間存在著一定的基因流[45].
2.7 其 它 線 蟲 Dame 等[46 ]在1992年應(yīng)用線粒體標(biāo)記分析奧斯特線蟲 （Ostertagia ostertagi） 的種群遺傳多樣性， 發(fā)現(xiàn)來自不同地理位置的種群間存在很高的基因流。 利用RAPD標(biāo)記技術(shù)， 選擇10條隨機(jī)性引物擴(kuò)增異小桿線蟲 （Heterorhabditis） 的基因組DNA,分析噬菌異小桿線蟲 （Heterorhabditis bacteriophora）（HP88 和E1）， 夏威夷異小桿線蟲 （H. hawaiiensis）（ MG-13） , H. hepialius （ Bodega Bay） , H. indicus（EMS-13和Coimbatore）， 大異小桿線蟲 （H. megidis）（HSH2和HO1）， H. zealandica和H. marelatus （OH10）等7種異小桿線蟲和不同隔離株之間的遺傳相似度及 差 異 關(guān) 系 . H. hawaiiensis MG-13、 H. indicus和H. zealandica這3種線蟲來自哥倫比亞 , EMS-13隔 離株 來 自 埃 及 , H . hepialius 來 自 加 利 福 尼 亞 ,H. marelatus來 自美國(guó) . 結(jié)果表明同一種個(gè)體間平均相似百分比為96.25%, 比較異小桿線蟲 的3個(gè) 種時(shí)， 發(fā)現(xiàn)隔離株之間的平均相似百分比為83.8%,不同種之間的平均相似百分比為31.3%[47].
應(yīng)用PCR-SSCP標(biāo)記和對(duì)線粒體cox1基因的部分片段測(cè)序兩種方法， 有學(xué)者分析了來自歐洲和亞洲不同地理起源， 寄生在貓、 狗和狐貍體內(nèi)的結(jié)膜吸允線蟲 （Thelazia callipaeda） 的種群遺傳結(jié)構(gòu)。 對(duì)歐洲37個(gè)個(gè)體 （寄生在狗、 狐貍和貓?bào)w內(nèi)） 的cox1基因序列進(jìn)行分析， 發(fā)現(xiàn)有6個(gè)核苷酸位點(diǎn)沒有發(fā)生突變。 而對(duì)亞洲的13個(gè)個(gè)體 （寄生在狗體內(nèi)） 的cox1基因序列進(jìn)行分析 , 發(fā) 現(xiàn)這6個(gè)核苷酸位點(diǎn)中5個(gè)位點(diǎn)發(fā)生了G→A轉(zhuǎn)換， 1個(gè)位點(diǎn)發(fā)生了C→T轉(zhuǎn)換。 PCR-SSCP標(biāo)記的分析結(jié)果與線粒體cox1基因測(cè)序分析結(jié)果一致， 說明PCR-SSCP對(duì)于結(jié)膜吸允線蟲的種群遺傳學(xué)研究是一個(gè)很好的分子遺傳標(biāo)記[48].
利用PCR-SSCP標(biāo)記分析寄生在有袋類和嚙齒類動(dòng)物體內(nèi)的毛細(xì)線蟲 （Capillaria sensulato） 的種群遺傳結(jié)構(gòu)， 結(jié)果表明來自同一宿主體內(nèi)的毛細(xì)線蟲沒有表現(xiàn)出明顯的遺傳差異， 并且在同一宿主體內(nèi)此類線蟲會(huì)寄生在1~3個(gè)不同的組織器官中， 但是來自不同宿主體內(nèi)的毛細(xì)線蟲則存在較明顯的遺傳差異， 提示可能由寄生宿主種類的特異性引起毛細(xì)線蟲的種群遺傳差異[49].
3結(jié)語(yǔ)
隨著分子生物學(xué)技術(shù)突飛猛進(jìn)的發(fā)展， 對(duì)寄生線蟲的分子分類學(xué)、 分子進(jìn)化學(xué)和種群遺傳學(xué)等方面取得了一些研究進(jìn)展， 但對(duì)于寄生線蟲這個(gè)龐大的生物群體而言還存在很多的科學(xué)空白。 近些年來， 國(guó)內(nèi)開展了關(guān)于捻轉(zhuǎn)血矛線蟲[26]、 旋 毛蟲[50]、美洲鉤蟲[51]和弓首蛔蟲 （Toxocara）[52]等寄生線蟲種群遺傳學(xué)的研究， 這些研究將為進(jìn)一步了解寄生線蟲的種群遺傳學(xué)特征提供良好的理論支持。 分子遺傳標(biāo)記技術(shù)的發(fā)展對(duì)寄生線蟲新蟲種的分子鑒定和系統(tǒng)進(jìn)化的研究起到了巨大的推動(dòng)作用。 然而， 對(duì)于大多數(shù)寄生線蟲而言， 基因組和遺傳進(jìn)化信息尚且未知， 這些資料的匱乏使得對(duì)寄生線蟲的宿主群的形成過程、 宿主的防御和選擇壓力以及寄生蟲藥物抗藥性形成的研究捉襟見肘， 不斷豐富寄生線蟲在基因組、 轉(zhuǎn)錄組、 蛋白組以及代謝組等方面的資料， 將會(huì)對(duì)研究其分子分類學(xué)、 群體遺傳學(xué)、 分子流行病學(xué)和寄生蟲病的防治提供重要的幫助。
參 考 文 獻(xiàn)
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