論文精選：《如何科學(xué)地開(kāi)設(shè)生化實(shí)驗(yàn)》
【摘 要】
隨著我國(guó)醫(yī)學(xué)教育改革的不斷深入，醫(yī)學(xué)教育的目標(biāo)已發(fā)展為培養(yǎng)高素質(zhì)、強(qiáng)能力、具有創(chuàng)新精神的綜合型人才。醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)是培養(yǎng)醫(yī)學(xué)人才的重要環(huán)節(jié)，根據(jù)我院的實(shí)際情況，生化實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目按照“基礎(chǔ)性實(shí)驗(yàn)”“綜合性實(shí)驗(yàn)”“設(shè)計(jì)創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)”三大板塊進(jìn)行開(kāi)設(shè)，聯(lián)系后續(xù)課程內(nèi)容及臨床。然而我院本科醫(yī)學(xué)生的生化實(shí)驗(yàn)，有一部分實(shí)驗(yàn)受到了學(xué)時(shí)不足、開(kāi)設(shè)難度大的限制，為了解決這一難題，我們生化實(shí)驗(yàn)室運(yùn)用了“倒敘法”合理縮短了學(xué)時(shí)，科學(xué)地開(kāi)設(shè)實(shí)驗(yàn)。下面我將就我們實(shí)驗(yàn)室開(kāi)設(shè)的幾個(gè)采用“倒敘法”的實(shí)驗(yàn)進(jìn)行闡述。
【關(guān)鍵詞】
生化實(shí)驗(yàn) 倒敘法 科學(xué)
為了適應(yīng)高等醫(yī)學(xué)院�；A(chǔ)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)的發(fā)展要求，培養(yǎng)醫(yī)學(xué)生的實(shí)踐能力和創(chuàng)新能力，我院針對(duì)全院本科醫(yī)學(xué)生的生物化學(xué)教學(xué)內(nèi)容進(jìn)行了合理地調(diào)整，增加了有利于學(xué)習(xí)掌握生物化學(xué)新技術(shù)、培養(yǎng)學(xué)生科研能力的較大型綜合創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)。原則上我院要求本科生生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)在四學(xué)時(shí)內(nèi)完成，然而聚丙烯酰胺凝膠盤(pán)狀電泳、醋酸纖維素薄膜電泳分離血清蛋白質(zhì)和蔗糖酶與淀粉酶的專(zhuān)一性這幾個(gè)實(shí)驗(yàn)，四個(gè)學(xué)時(shí)是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的。在教學(xué)要求與教學(xué)條件的矛盾沖突下，我們實(shí)驗(yàn)室就采用“倒敘法”來(lái)順利完成這些實(shí)驗(yàn)。
聚丙烯酰胺凝膠盤(pán)狀電泳實(shí)驗(yàn)按照正常的操作順序應(yīng)該是：1.制備分離膠;2.制備濃縮膠;3.準(zhǔn)備電泳槽;4.上樣;5.電泳;6.剝膠;7.固定、染色、漂洗;8.觀察結(jié)果。而我們實(shí)驗(yàn)室則采用“倒敘法”，第一輪實(shí)驗(yàn)所需要的凝膠包括分離膠和濃縮膠都由實(shí)驗(yàn)室的老師準(zhǔn)備就緒，往后每一輪實(shí)驗(yàn)所需的凝膠由上一輪實(shí)驗(yàn)的同學(xué)制備，將這個(gè)實(shí)驗(yàn)分段同時(shí)進(jìn)行。具體操作則變?yōu)椋?.準(zhǔn)備電泳槽;2.上樣;3.電泳（電泳所需要的時(shí)間大概為一個(gè)小時(shí)左右，在這一個(gè)小時(shí)跑電泳的時(shí)間里，我們可以完成后續(xù)的實(shí)驗(yàn)內(nèi)容）;4.制備分離膠;5.濃縮膠制備;6.剝膠;7.固定與染色、脫色;8.觀察結(jié)果。要合理地運(yùn)用時(shí)間來(lái)完成這個(gè)實(shí)驗(yàn)。
醋酸纖維素薄膜電泳分離血清蛋白質(zhì)的實(shí)驗(yàn)中，我們也是先電泳以后再具體講原理和操作步驟以及方法。按照正常的程序應(yīng)該是先講實(shí)驗(yàn)?zāi)康�、�?shí)驗(yàn)原理、實(shí)驗(yàn)器材與試劑，然后再重點(diǎn)講解實(shí)驗(yàn)步驟，講完以后同學(xué)們?cè)匍_(kāi)始操作。然而我們先簡(jiǎn)單地介紹一下實(shí)驗(yàn)操作，然后開(kāi)始點(diǎn)樣，點(diǎn)完樣以后再上樣和進(jìn)行電泳。電泳跑上了以后我們?cè)倮^續(xù)接著講實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?shí)驗(yàn)原理、實(shí)驗(yàn)器材與試劑，再詳細(xì)介紹實(shí)驗(yàn)步驟，及每一個(gè)步驟需要注意的注意事項(xiàng)。薄膜準(zhǔn)備：一般要浸泡半個(gè)小時(shí)以上，每一次都由實(shí)驗(yàn)室的老師先準(zhǔn)備好;儀器準(zhǔn)備：剪裁尺寸合適的“濾紙橋”是用來(lái)聯(lián)系醋酸纖維薄膜和兩極緩沖液之間的中間 “橋梁”（也由實(shí)驗(yàn)室的老師準(zhǔn)備好）;點(diǎn)樣;電泳：調(diào)節(jié)電壓，預(yù)電泳（50V，5min），然后再調(diào)節(jié)至120V左右，通電45分鐘，待電泳區(qū)帶展開(kāi)至薄膜三分之二處時(shí)，停止通電;染色：用鑷子小心將薄膜取出，浸于氨基黑10B染色液中染色1-3分鐘;漂洗：漂洗3次干凈的薄膜用濾紙吸干，可見(jiàn)5條界限清晰的區(qū)帶;定量分析：剪下薄膜各蛋白色帶分別放入NaOH溶液中，30分鐘后去測(cè)其吸光度值;計(jì)算：計(jì)算各蛋白的相對(duì)百分含量和A/G比值。這樣就有效地縮短了學(xué)時(shí)，圓滿地完成了實(shí)驗(yàn)。
蔗糖酶與淀粉酶的專(zhuān)一性實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)的`操作步驟：1.酵母蔗糖酶提出液制備：取鮮酵母（面包酵母）1小勺，放在小試管內(nèi)，倒入甲苯1～2ml，用粗玻璃棒攪拌約30～45分鐘使酵母液化，然后加蒸餾水3～5ml，充分混勻。3000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，傾棄上清液，保留沉淀于小試管中，加蒸餾水1.5ml，甲苯0.2ml，混勻，在30℃水浴中過(guò)夜。次日取出，用玻璃棒攪勻，一邊攪拌一邊加3～5%稀醋酸，調(diào)節(jié)pH至3.5～4.0（用pH試紙測(cè)試），離心（3000轉(zhuǎn)/分）10分鐘。將上清液傾入潔凈的燒杯內(nèi)，加入少量硅藻土（約一小匙），混勻，3000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘。上清液用氨水中和至pH 5左右，放4℃冰箱保存?zhèn)溆�。使用前可根�?jù)實(shí)驗(yàn)需要的活性大小適當(dāng)稀釋。2.準(zhǔn)備稀釋唾液（淀粉酶的來(lái)源）：實(shí)驗(yàn)者先用水漱口，然后含一口蒸餾水于口中輕漱一、二分鐘，吐入小燒杯中。3.取6支試管按表格依次加入試劑，每管混勻后置于37℃恒溫水浴中保溫30min。另取大試管6支，每支試管中加Benedict試劑1ml（約20滴），加熱煮沸后，分別將保溫后的試管中的液體加入之，繼續(xù)煮沸2分鐘，放試管架上冷卻，觀察并記錄結(jié)果。解釋實(shí)驗(yàn)結(jié)果。操作步驟中要求在30℃水浴中過(guò)夜，所以過(guò)夜這一部分的內(nèi)容由實(shí)驗(yàn)室的老師提前給同學(xué)們準(zhǔn)備好。同學(xué)們從次日取出開(kāi)始操作，做完以后在保溫的30min時(shí)間里再做過(guò)夜的這一部分，做完又可以給下一個(gè)班的同學(xué)使用。這樣輪回倒轉(zhuǎn)法使我們的實(shí)驗(yàn)有序完成。
這些實(shí)驗(yàn)運(yùn)用“倒敘法”在我院已通過(guò)多年的實(shí)踐，在圓滿完成本實(shí)驗(yàn)的全面教學(xué)的同時(shí)，讓原來(lái)的四個(gè)學(xué)時(shí)完成不了的成為可能，既滿足了人才培養(yǎng)的教學(xué)需要，又克服了學(xué)時(shí)不足的現(xiàn)實(shí)條件，為實(shí)現(xiàn)創(chuàng)新人才培養(yǎng)目標(biāo)、促進(jìn)實(shí)驗(yàn)教學(xué)改革奠定了基礎(chǔ)。
【參考文獻(xiàn)】
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