生物醫(yī)藥論文
大黃素標(biāo)準(zhǔn)品在紫外分光光度計(jì)掃描下,最大吸收波長為225、285、435 nm,在選定的流動(dòng)相下,其中波長為285 nm時(shí),大黃素的峰最高,附近沒有雜質(zhì)峰,基線平穩(wěn)。故選定285 nm為檢測(cè)波長。本試驗(yàn)首次采用HPLC法對(duì)廣西產(chǎn)道地藥材紅穿破石的主成分大黃素進(jìn)行含量測(cè)定。大黃素具有抗炎、抑菌、利尿、利膽等藥理作用,這進(jìn)一步證實(shí)民間常用于尿路感染、急慢性腎炎、腎結(jié)石的治療是有一定道理的。本試驗(yàn)僅考察廣西等10個(gè)地區(qū)的紅穿破石,且不同產(chǎn)地的.紅穿破石的大黃素含量差異較大,桂林產(chǎn)的紅穿破石的大黃素含量最高,同一株植物根的含量最大,約為莖的2倍。這些差異可能是由藥材的產(chǎn)地、生長環(huán)境、采收期不同等原因造成。
1 儀器與試藥
美國Agilent1100系列高效液相色譜儀(包括四元泵,自動(dòng)進(jìn)樣器,脫氣機(jī),紫外可見檢測(cè)器,柱溫箱和Agilent1100化學(xué)工作站),BUG40型超聲波清洗器。
大黃素對(duì)照品(批號(hào)110756-200110,含量測(cè)定用)由中國藥品生物制品檢定所提供,純度在98%以上；紅穿破石由廣西玉林制藥有限責(zé)任公司提供,來源于廣西各地,經(jīng)廣西玉林制藥有限責(zé)任公司中藥鑒定室專家鑒定。水為重蒸餾水,甲醇為色譜純,其余試劑均為分析純。
2 方法與結(jié)果
2.1 色譜條件
Agilent Eclipse XDB-C18色譜柱(4.6 mm×150 mm,5 μm)；流動(dòng)相為甲醇-0.1%磷酸溶液(75∶25)；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長：285 nm；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。理論板數(shù)按大黃素計(jì)算應(yīng)不低于3 000。在此色譜條件下,紅穿破石樣品能夠達(dá)到基線分離(見圖1)。
2.2 對(duì)照品溶液的制備
精密稱取大黃素對(duì)照品適量,加甲醇制成每1 mL含大黃素6.3 μg的溶液,作為對(duì)照品溶液。 取紅穿破石粉末適量,取0.4 g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入甲醇50 mL,稱定重量,超聲30 min,放冷,再稱定重量,用甲醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過,濾液用微孔濾膜(0.45 μm)濾過,取續(xù)濾液,作為供試品溶液。
2.3 線性關(guān)系的考察
分別精密吸取大黃素對(duì)照品溶液(6.3 μg/mL)1、2、4、6、8、10 mL,置于10 mL容量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,各進(jìn)樣10 μL,連續(xù)進(jìn)樣2次,測(cè)定峰面積。以對(duì)照品進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo),峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程：Y＝4 172.28A＋0.46,r＝0.999 9,結(jié)果表明,大黃素在0.006 3～0.063 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。
2.4 試驗(yàn)
取大黃素對(duì)照品溶液,各重復(fù)進(jìn)樣6次,測(cè)定峰面積,結(jié)果大黃素峰面積值為265.8、268.5、265.8、268.3、267.9、267.7,RSD＝0.4%。表明具有較好的精密度。取同一批的樣品6份,按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,測(cè)定大黃素峰面積,結(jié)果為222.2、223.9、222.0、225.2、223.7、222.6,RSD＝0.5%。表明該法重現(xiàn)性良好。取同一供試品溶液,分別于配制后0、4、8、12 h,依法測(cè)定峰面積,結(jié)果RSD＝0.25%,表明樣品溶液在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。
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