解剖實(shí)驗(yàn)報(bào)告
蛙類坐骨神經(jīng)–腓腸肌標(biāo)本制備、不同頻率刺激對肌肉收縮的影響
一．目的要求
1. 掌握蛙類雙毀髓的試驗(yàn)方法；
2. 掌握坐骨神經(jīng)—腓腸肌標(biāo)本標(biāo)本的制作方法；
3. 觀察不同刺激頻率對骨骼肌收縮形式的影響。
二．基本原理
蛙類動(dòng)物的某些基本活動(dòng)，如神經(jīng)的生物電活動(dòng)、肌肉收縮等與哺乳動(dòng)物相似。其離體組時(shí)所需的生活條件比較簡單，易于控制和掌握，而且動(dòng)物來源豐富，因此在生理實(shí)驗(yàn)中常用蛙類的坐骨神經(jīng)—腓腸肌標(biāo)本和坐骨神經(jīng)標(biāo)本來觀察組織的興奮性、刺激與反應(yīng)的規(guī)律以及骨骼肌收縮的特點(diǎn)等。肌肉受到一次閾上刺激而產(chǎn)生的一次收縮為單收縮，其過程可分為三個(gè)時(shí)相，即潛伏期、縮短期和舒張期。肌肉受到連續(xù)的閾上刺激時(shí)，如果刺激間隔小于單收縮的過程，相鄰兩單收縮的時(shí)相會(huì)出現(xiàn)融合，表現(xiàn)為強(qiáng)直收縮現(xiàn)象。如果表現(xiàn)為每次收縮的開始發(fā)生在上次收縮的縮短期，稱完全強(qiáng)直收縮，如果表現(xiàn)為每次收縮的開始發(fā)生在上次收縮的舒張期，稱不完全強(qiáng)直收縮。使用生物信號采集處理系統(tǒng)，可以觀察到腓腸肌收縮的情況。
三．實(shí)驗(yàn)材料
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：健康青蛙一只；
實(shí)驗(yàn)器材和藥品：蛙類手術(shù)器械一套（粗剪刀一把，組織剪一把，眼科剪一把，鑷子一把，探針一根、玻璃分針2把，蛙釘4個(gè)、培養(yǎng)皿一個(gè)，蛙板一個(gè)、滴管一個(gè)、棉線若干），張力換能器，肌槽，刺激電極，鐵架臺，生物信號采集處理系統(tǒng)，微機(jī)，任氏劑。
四．實(shí)驗(yàn)步驟
搗毀蟾蜍腦脊髓：取蟾蜍一只，用自來水沖洗干凈。左手握蛙，用食指下壓頭部前端，拇指按壓背部，使頭前俯。中指與無名指夾其前肢，無名指與小指夾其后肢，使整個(gè)軀干做最大屈曲。把探針自枕骨大孔處垂直刺入，到達(dá)椎管，即將探針改變方向刺入顱腔，向各側(cè)不斷攪動(dòng)，徹底搗毀腦組織；再將探針原路退出，刺向尾側(cè)，捻動(dòng)探針使其逐漸刺入整個(gè)椎管內(nèi)，完全徹底搗毀脊髓。脊髓破壞完全的標(biāo)志是：下頜呼吸運(yùn)動(dòng)消失，反射消失，四肢松軟。
剪除軀干上部和內(nèi)臟，去皮，制備下肢標(biāo)本： 用粗剪刀在骶髂關(guān)節(jié)前1厘米處剪斷脊柱，握住蟾蜍下肢，沿軀干兩側(cè)（避開坐骨神經(jīng)）剪開腹壁。此時(shí)軀干上部及內(nèi)臟即全部下垂。剪除全部軀干及內(nèi)臟組織。剪去肛周皮膚；用圓頭鑷子夾住脊柱，注意不要碰到坐骨神經(jīng)，捏住皮膚邊緣，逐步向下牽拉剝離皮膚。將全部皮膚剝除后，把標(biāo)本置于盛有任氏液的培養(yǎng)皿中。 2.1.1.3洗凈雙手和用過的全部手術(shù)器械。
分離兩下肢： 避開坐骨神經(jīng)，用粗剪刀從背側(cè)剪去骶骨，然后沿中線將脊柱剪成左右兩半，再從恥骨聯(lián)合中央剪開，將已分離的標(biāo)本浸入盛有任氏液的培養(yǎng)皿中。 2.1.1.5 取出一下肢，用蛙釘固定于蛙板上，固定時(shí)要注意，坐骨神經(jīng)和腓腸肌朝上。先用玻璃分針沿脊柱側(cè)游離坐骨神經(jīng)腹腔部，然后循股二頭肌和半膜肌之間的坐骨神經(jīng)溝，縱向分離暴露坐骨神經(jīng)之大腿部分直至腘窩，在分離過程中，把神經(jīng)周圍的結(jié)締組織去除干凈，并把神經(jīng)的細(xì)小分支剪斷，但要注意不要用金屬器械碰觸神經(jīng)，也不要對神經(jīng)過度牽拉。實(shí)驗(yàn)期間應(yīng)不斷滴加任氏液使神經(jīng)保持濕潤。
用玻璃分針游離腓腸肌，并在下面穿線，在跟腱處打結(jié)。在結(jié)扎線的下方剪斷跟腱，在膝關(guān)節(jié)處把除腓腸肌外的小腿其他部分剪除。注意保持完整的腓腸肌。 2.1.1.7用棉線在靠近脊柱的位置結(jié)扎坐骨神經(jīng)，并在結(jié)扎線的上方剪斷神經(jīng)，用眼科剪剪斷坐骨神經(jīng)的全部支。從腘窩處開始剪掉大腿所有的肉，盡量把股骨刮干凈，在膝關(guān)節(jié)上至少1cm處剪去上段股骨。將標(biāo)本浸入任氏劑的培養(yǎng)皿中。
實(shí)驗(yàn)裝置與儀器連接：1.將標(biāo)本股骨殘端固定在肌槽上的小孔內(nèi)；2.將結(jié)扎腓腸肌肌腱的.棉線與張力換能器連接，調(diào)節(jié)棉線的松緊，要與桌面垂直；3.將神經(jīng)置于肌槽的刺激電極上，用任氏劑保持標(biāo)本濕潤；4.刺激電極插入微機(jī)上的刺激輸入孔；5.張力換能器與微機(jī)相應(yīng)通道相連。
打開電腦，進(jìn)入生物信號采集處理系統(tǒng)，在菜單欄選擇“實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目”--------》“神經(jīng)肌肉”-------》“刺激強(qiáng)度與反應(yīng)的關(guān)系實(shí)驗(yàn)?zāi)K”點(diǎn)擊開始，調(diào)節(jié)刺激參數(shù)，使頻率自動(dòng)逐漸遞增，串間隔為2.連續(xù)記錄不同頻率時(shí)的肌肉收縮曲線。
五．結(jié)果與分析
不同頻率刺激對肌肉收縮的影響：串間隔為2,頻率增量為1時(shí)的張力變化（如圖）可見單收縮、不完全強(qiáng)直收縮、完全強(qiáng)直收縮。
分析：刺激強(qiáng)度到達(dá)閾刺激時(shí)腓腸肌開始收縮，在最大刺激收縮力前隨刺激強(qiáng)度增大而增大，到達(dá)最大刺激強(qiáng)度后，收縮力不發(fā)生明顯改變；在最大刺激強(qiáng)度條件下，某較小頻率使腓腸肌發(fā)生單收縮(如圖中第一次刺激)，頻率增大到，單收縮變?yōu)椴煌耆珡?qiáng)直收縮（如圖中第2-6次刺激），頻率繼續(xù)增大，不完全強(qiáng)直收縮變?yōu)橥耆珡?qiáng)制收縮（如圖中第7、8次刺激）。不同的腓腸肌其閾刺激，最大刺激均存在差異；其單收縮，不完全強(qiáng)直收縮和完全強(qiáng)直收縮所要頻率也不盡相同。
六．實(shí)驗(yàn)總結(jié)
本次試驗(yàn)嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行，所得實(shí)驗(yàn)結(jié)果較為理想，很容易觀察到腓腸肌的單收縮、不完全強(qiáng)直收縮、完全強(qiáng)直收縮現(xiàn)象。在實(shí)驗(yàn)的過程中，制備坐骨神經(jīng)-腓腸肌標(biāo)本是最繁瑣的步驟，也是實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵所在，期間，我們進(jìn)行的比較緩慢，生怕弄錯(cuò)了哪一步，一步步想原理、回憶老師是怎么說的，所幸的是我們最終成功了，得到了較好的結(jié)果，在這次的不斷嘗試和思考中，很好地鍛煉了我們的動(dòng)手能力和思維能力。
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