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      2. 細胞生物學實驗報告

        時間:2024-04-28 08:50:07 文圣 報告 我要投稿
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        細胞生物學實驗報告(精選5篇)

          在現在社會,越來越多人會去使用報告,報告具有成文事后性的特點。你還在對寫報告感到一籌莫展嗎?以下是小編為大家收集的細胞生物學實驗報告,歡迎閱讀與收藏。

        細胞生物學實驗報告(精選5篇)

          細胞生物學實驗報告 1

          實驗目的

          1、學習并掌握動物細胞培養(yǎng)的無菌操作技術。

          2、了解原代細胞培養(yǎng)的基本方法及操作過程。

          3、學習細胞計數及營養(yǎng)液的配制。

          實驗原理

          1、細胞原代培養(yǎng)

          原代細胞培養(yǎng)是指直接從動物體內獲取的細胞、組織和器官,經體外培養(yǎng)后,直到第一次傳代為止。這種培養(yǎng),首先用無菌操作的方法,從動物體內取出所需的組織(或器官),經消化,分解成單個游離細胞,在人工培養(yǎng)下,使其不斷的生長及繁殖。

          細胞培養(yǎng)是一種操作繁瑣而又要求十分嚴謹的實驗技術。要使細胞能在體外長期生長,必須滿足兩個基本要求:

          一是供給細胞存活所必須的條件,如適量的水、無機鹽、氨基酸、維生素、葡萄糖及其有關的生長因子、氧氣、適宜的溫度,注意外環(huán)境酸堿度與滲透壓的調節(jié)。

          二是嚴格控制無菌條件。

          2、細胞死活鑒定死活細胞的鑒定方法有很多種,常用的有染色法和儀器分析法。染色法是常用的細胞死活鑒定方法,簡便,易于操作。不同的死活細胞鑒定方法有各自不同具體的反應機理,但無論采用何種辦法,都是利用了死活細胞在生理機能和性質上的差異。

          染色法分化學染色法和熒光染色法,根據染色機理的不同,染料或使死細胞著色,或使活細胞著色。

          死活細胞在生理機能和性質上的差異主要包括:

          1、死活細胞細胞膜通透性的差異:活細胞的細胞膜是一種選擇性膜,對細胞起保護和屏障作用,只允許物質選擇性的.通過;而細胞死亡之后,細胞膜受損,通透性增加。常用的以臺盼藍鑒別細胞死活的方法就是利用了這一性質。臺盼藍,又稱錐藍,是一種陰離子型染料,不能通過完整的細胞膜。所以經臺盼藍染色后只能使死細胞著色,而活細胞不被著色。甲基藍有類似的染色機理。植物細胞的質壁分離也可鑒定死活。

          2、死活細胞在代謝上的差異:是采用美藍染料鑒定酵母細胞死活的依據。美藍是一種無毒染料,氧化型為藍色,還原型為無色。由于活細胞中新陳代謝的作用,使細胞內具有較強的還原能力,能使美藍從藍色的氧化性變?yōu)闊o色的還原型,因此美藍染色后活的酵母細胞無色;而死細胞或代謝緩慢的老細胞,則因它們的無還原能力或還原能力極弱,使美藍處于氧化態(tài),從而被染成藍色或淡藍色。

          除此之外,還有一些細胞器的專有染料。如液泡系的專有染料中性紅。中性紅是一種低毒性染料,可以使活細胞液泡著紅色,而細胞質和細胞核不被著色;死細胞的液泡不被著色或淺染,染料彌散于整個細胞中,細胞核和細胞質被染成紅色。有時侯為了增加染色效果可以將兩種染料結合使用,如甲基藍-中性紅混合染色法。

          實驗用品

          1、材料小白鼠

          2、試劑

          臺盼藍、伊紅、PBS緩沖液、細胞培養(yǎng)液(含生長因子)

          3、器材

          剪子、棉球、75%酒精、移液槍、無菌操作臺、正置光學顯微鏡、倒置光學顯微鏡、解剖盤、滴管、離心管、離心機、注射器、Eppendorf管、培養(yǎng)皿、酒精燈、塑料培養(yǎng)皿、載玻片、蓋玻片、血細胞計數板

          實驗步驟

          1、取材

          取小鼠一只,采用斷頭法處死。清水洗小鼠浸入75%酒精中消毒3min,取出轉入超凈工作臺內的解剖盤中,無菌操作打開腹腔,取出其脾臟,除去其周圍的脂肪組織,并用PBS液自上而下淋洗1-2次,轉入無菌培養(yǎng)皿中待用。

          2、分離脾細胞

          用滴管向培養(yǎng)皿中注入30滴PBS緩沖液,再用“L”型針頭注射器在皿中吸取0.2毫升PBS液注入脾臟,注射時沿長軸注射。然后再用針頭在脾臟上扎眼,并用“L”型針頭輕輕刮出脾細胞。在均勻吹勻脾臟細胞。

          吸取上述分離的單個脾細胞懸液,放入Eppendorf管中,使量至1mL,以1000r/min離心5min。

          3、培養(yǎng)脾細胞

          取塑料培養(yǎng)皿一套,用移液槍吸取培養(yǎng)液2mL加入塑料皿中,并將皿標記待用。取離心后的Eppendorf管,棄去上清液,用移液槍(200ul)吸取塑料皿中的培養(yǎng)液400ul加入棄去上清的Eppendorf管中,用槍頭吹勻管底的脾細胞,吸取200ul脾細胞懸液接種于上述塑料皿中,混勻后放入37°C,5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

          4、配制染液

          用生理鹽水配成5%臺盼藍染液,備用。

          5、染色

          取0.5mL細胞懸濁液放入試管中,加入1-2滴染液;旌稀2-5min后將細胞放在血細胞計數板上觀察死活情況,注意不要有氣泡產生,放大倍數為10x10。染色后活細胞不著色,死細胞顯示藍色。注意染色時間不能超過15min,否則染液將細胞毒殺。

          6、計數

          在10x10倍的顯微鏡下觀察,計算血細胞計數板的4個4小方格的細胞數量。包括細胞總數與死細胞數量。壓線者計上不計下,計左不計右。

          7、計算細胞活力

          根據公式:細胞活力=(總細胞數-死細胞數)/總細胞數×100%

          實驗結果

          臺盼藍染色后的細胞(10x10)伊紅染色后的細胞(10x10)

          總細胞數和活細胞數統(tǒng)計表(10×10)

          項目自己培養(yǎng)細胞老師培養(yǎng)細胞總細胞數個/ml活細胞數個/ml細胞活力1.4×1067.5×1053.0×1055.5×10521.4%73.3%

          分析與討論

          1、結果分析

          本次實驗中我們小組自己培養(yǎng)細胞所測細胞活力為21.4%,并不算高,分析得應有以下原因可能影響實驗結果(包括誤差):

         、湃粼跓o菌操作的過程中操作不規(guī)范,導致染菌,會極大的影響觀察,導致實驗失敗。

         、迫粼陔x心分離呈單細胞的過程中離心機轉速過快或時間過長很可能會導致細胞破裂,導致小鼠脾細胞大量死亡。

         、侨旧珪r間過長,或觀察時間過長都會導致染色試劑將細胞殺死,使細胞活力驟降,這是導致細胞活力比較低的重要原因。

          ⑷實驗中的一些操作不正確或不規(guī)范的情況、計算帶來的誤差等也會直接導致實驗誤差。

          2、注意事項

         、艊栏襁M行動物消毒,需用75%酒精消毒。

         、茋栏襁M行無菌操作,防止細菌、霉菌、支原體污染,避免化學物質污染。

         、俏∫后w前,瓶口和吸管硬行火焰消毒;吸取液體時,避免碰撞。

         、入x心管入臺前,管口、管壁應消毒。

          ⑸實驗者離開超凈臺時,要隨時用肘部關閉工作窗。

         、势鞑氖褂脮r既要注意用火焰消毒,又要防止燙傷、燙死細胞。

          細胞生物學實驗報告 2

          一、實驗目的:

          1、掌握顯示細胞中過氧化物酶反應的原理和方法。

          2、了解細胞凋亡的生物學意義

          3、掌握凋亡細胞的形態(tài)學檢測方法

          二、實驗原理:

          1、細胞內的過氧化物酶能把許多胺類氧化為有色化合物,用聯苯胺處理標本,細胞內的過氧化物酶能把聯苯胺氧化為藍色的聯苯胺藍,進而變?yōu)樽厣a物,因而可以根據顏色反應來判定過氧化物酶的有無或多少。中間產物藍色聯苯胺是不穩(wěn)定的,無需酶的參加即可氧化為棕色化合物。

          2、細胞凋亡是指細胞在生理或病理條件下,遵循自身的程序,自己結束其生命的過程。它是一個主動的、高度有序的,基因控制的,一系列酶參與的過程。

          3、凋亡細胞形態(tài)學特征是:體積變小,細胞質濃縮;細胞核發(fā)生染色質凝聚和聚集于核膜周圍(邊緣化);細胞膜有小泡狀形成;晚期細胞膜內陷形成大小不同的凋亡小體;根據細胞凋亡形態(tài)學特征進行顯微觀察是檢測細胞凋亡的一種直觀、可靠的方法。

          三、實驗步驟:

          細胞中過氧化物酶的顯示

          1、在載片上滴一滴PBS緩沖液;

          2、取骨髓細胞:用斷頸法處死小鼠,立即剪取后肢,去除肌肉,剝出后肢股骨,剪開股骨一端,用牙簽尖的'一端插入剪開的小孔中,摳取少許骨髓細胞置滴有PBS的載片上;

          3、涂片:用另一玻片將骨髓細胞沿一個方向涂布推開,室溫晾干;

          4、媒染:在涂片上滴0.5%硫酸銅液,以蓋滿涂片為宜,處理30秒-1分鐘。

          5、傾去硫酸銅液,直接滴入聯苯胺混合液反應6分鐘(以蓋滿涂片為宜)

          6、清水沖洗,番紅復染2min。

          7、鏡檢:清水沖洗,室溫晾干,先低倍鏡下觀察,后換高倍鏡下觀察(油鏡100×)

          細胞凋亡的形態(tài)學檢測與觀察吉姆薩染色:

          1、取細胞爬片置于小培養(yǎng)皿中(有細胞面朝上)

          2、生理鹽水輕輕漂洗細胞

          3、95%乙醇固定5min

          4、PBS緩沖液洗2次

          5、吉姆薩染色液染色5min

          6、蒸餾水輕輕洗去染液

          7、普通光學顯微鏡下觀察。

          吖啶橙染色:

          1、取細胞爬片置于小培養(yǎng)皿中(有細胞面朝上)

          2、生理鹽水輕輕漂洗細胞

          3、甲醇:冰醋酸(3:1)固定5min

          4、PBS緩沖液洗2次每次1min

          5、0.01%吖啶橙染色液在避光環(huán)境下染色5min6、蒸餾水輕輕洗去染液

          6、選用藍光激發(fā)濾片在熒光顯微鏡下觀察。

          四、結果與分析:

          根據隨機選擇的幾個視野的統(tǒng)計,該樣品的細胞凋亡率=227/506×100=44.9

          Hela細胞凋亡過程中核染色質的形態(tài)變化(吖啶橙染色)

          五、思考題:

          1、細胞凋亡的調控機制

          細胞凋亡是一個受基因調控、眾多細胞膜受體和胞漿蛋白參與的細胞主動自殺過程,其觸發(fā)因素多種多樣,包括細胞內誘導因子和抑制因子對細胞凋亡的調控。

          2、細胞凋亡的特征

          凋亡細胞形態(tài)學特征是:體積變小,細胞質濃縮;細胞核發(fā)生染色質凝聚和聚集于核膜周圍(邊緣化);細胞膜有小泡狀形成;晚期細胞膜內陷形成大小不同的凋亡小體。

          3、研究細胞凋亡的方法

          定性的研究方法:常規(guī)瓊脂糖凝膠電泳、脈沖場倒轉瓊脂糖凝膠電泳、形態(tài)學觀察(普通光學顯微鏡、透射電鏡、熒光顯微鏡)

          定量或半定量的研究方法:各種流式細胞儀方法、原位末端標記法、ELISA定量瓊脂糖凝膠電泳。

          細胞生物學實驗報告 3

          一、實驗目的

          1、觀察植物細胞有絲分裂的過程,識別有絲分裂的不同時期。

          2、初步掌握制作洋蔥根尖有絲分裂裝片的技能。

          3、初步掌握繪制生物圖的方法。

          二、實驗原理

          在植物體中,有絲分裂常見于根尖、莖尖等分生區(qū)細胞,高等植物細胞有絲分裂的過程,分為分裂間期和分裂期的前期、中期、后期、末期。可以用高倍顯微鏡觀察植物細胞的有絲分裂的過程,根據各個時期細胞內染色體(或染色質)的變化情況,識別該細胞處于有絲分裂的.哪個時期,細胞核內的染色體容易被堿性染料著色。

          三、材料用具

          洋蔥根尖、顯微鏡、載玻片、蓋玻片、滴管、鑷子、培養(yǎng)皿、鉛筆、質量分數為15%的鹽酸、體積分數為95%的酒精、質量分數為0.01g/ml的龍膽紫(或紫藥水)

          四、實驗過程

          1、洋蔥根尖的培養(yǎng)(提前3—4天)

          2、解離:5min

          3、漂洗:10min

          4、染色:5min

          5、制片

          6、鏡檢

          五、注意

          1、解離充分是實驗成功的必備條件。解離充分,組織才能分散,細胞也不會重疊。

          2、漂洗時間一定要足夠,否則細胞染不上色。

          3、染色時,染液的濃度和染色時間必須掌握好。特別是染色不能過深,否則鏡下一片紫色,無法觀察。

          六、討論

          1、制作好洋蔥根尖有絲分裂裝片的關鍵是什么?談談你自己的體會。

          2、在觀察清楚有絲分裂各個時期的細胞以后,繪出洋蔥根尖細胞有絲分裂的簡圖,并標明時期。

          細胞生物學實驗報告 4

          一、實驗目的

          1、初步掌握高倍顯微鏡的使用方法。

          2、觀察高等植物的葉綠體在細胞質基質中的形態(tài)和分布

          二、實驗原理

          高等植物的葉綠體呈橢球狀,在不同的光照條件下,葉綠體可以運動,改變橢球體的方向,這樣既能接受較多的光照,又不至于被強光灼傷。在強光下,葉綠體以其橢球體的側面朝向光源;在弱光下,葉綠體以其橢球體的正面朝向光源。因此,在不同光照條件下采集的葫蘆蘚,其小葉內葉綠體橢球體的形狀不完全一樣。

          活細胞中的細胞質處于不斷的流動狀態(tài),觀察細胞質的.流動,可以用細胞質基質中的葉綠體的運動做為標志。

          三、材料用具

          蘚類的葉,新鮮的黑藻,顯微鏡,載玻片,蓋玻片,滴管,鑷子,刀片,培養(yǎng)皿,鉛筆

          四、實驗過程

          1.制作蘚類葉片的臨時裝片

          2.用顯微鏡觀察葉綠體

          3.制作黑藻葉片臨時裝片

          4.用顯微鏡觀察細胞質流動

          五、討論

          1.細胞質基質中的葉綠體是否靜止不動,為什么?

          2.葉綠體的形態(tài)和分布與葉綠體的功能有什么關系?

          3.植物細胞的細胞質處于不斷的流動狀態(tài),這對于活細胞完成生命活動有什么意義?

          4.用鉛筆畫一個葉片細胞,標出葉綠體的大致流動方向。

          細胞生物學實驗報告 5

          一、實驗目的

          1. 初步學會觀察植物細胞質壁分離和復原的方法。

          2. 理解植物細胞發(fā)生滲透作用的原理。

          二、實驗原理

          當細胞液的濃度小于外界溶液的濃度時,細胞液中的水分就通過原生質層進入外界溶液中,使細胞壁和原生質層都出現一定的收縮。由于原生質層比細胞壁的收縮性大,當細胞不斷失水時,原生質層就會與細胞壁逐漸分離開,也就是分升了質壁分離當細胞液的'濃度大于外界溶液的濃度時,外界溶液中的水分就通過原生質層進入細胞液中,整個原生質層就會慢慢地恢復成原來的狀態(tài),使植物細胞逐漸發(fā)生質壁分離復原。

          三、材料用具

          紫色洋蔥鱗片葉、顯微鏡、載玻片、蓋玻片、滴管、鑷子、刀片、吸水紙、清水、0.3g/ml蔗糖溶液

          四、實驗過程

          物理實驗報告 ——化學實驗報告 ——生物實驗報告 ——實驗報告格式 ——實驗報告模板

          五、討論

          1.如果將洋蔥表皮細胞浸潤在與細胞液濃度相同的蔗糖溶液中,這些表皮細胞會出現什么現象?

          2.當紅細胞細胞膜兩側的溶液具有濃度差時,紅細胞會不會發(fā)生質壁分離現象?為什么?

          3.畫一個細胞在正常狀態(tài)下到經過0.3g/ml蔗糖溶液處理,再經過清水處理的細胞變化的一系列模式圖。

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