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      2. 細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告

        時(shí)間:2024-04-28 08:50:07 文圣 報(bào)告 我要投稿
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        細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告(精選5篇)

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        細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告(精選5篇)

          細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告 1

          實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>

          1、學(xué)習(xí)并掌握動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的無(wú)菌操作技術(shù)。

          2、了解原代細(xì)胞培養(yǎng)的基本方法及操作過(guò)程。

          3、學(xué)習(xí)細(xì)胞計(jì)數(shù)及營(yíng)養(yǎng)液的配制。

          實(shí)驗(yàn)原理

          1、細(xì)胞原代培養(yǎng)

          原代細(xì)胞培養(yǎng)是指直接從動(dòng)物體內(nèi)獲取的細(xì)胞、組織和器官,經(jīng)體外培養(yǎng)后,直到第一次傳代為止。這種培養(yǎng),首先用無(wú)菌操作的方法,從動(dòng)物體內(nèi)取出所需的組織(或器官),經(jīng)消化,分解成單個(gè)游離細(xì)胞,在人工培養(yǎng)下,使其不斷的生長(zhǎng)及繁殖。

          細(xì)胞培養(yǎng)是一種操作繁瑣而又要求十分嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膶?shí)驗(yàn)技術(shù)。要使細(xì)胞能在體外長(zhǎng)期生長(zhǎng),必須滿足兩個(gè)基本要求:

          一是供給細(xì)胞存活所必須的條件,如適量的水、無(wú)機(jī)鹽、氨基酸、維生素、葡萄糖及其有關(guān)的生長(zhǎng)因子、氧氣、適宜的溫度,注意外環(huán)境酸堿度與滲透壓的調(diào)節(jié)。

          二是嚴(yán)格控制無(wú)菌條件。

          2、細(xì)胞死活鑒定死活細(xì)胞的鑒定方法有很多種,常用的有染色法和儀器分析法。染色法是常用的細(xì)胞死活鑒定方法,簡(jiǎn)便,易于操作。不同的死活細(xì)胞鑒定方法有各自不同具體的反應(yīng)機(jī)理,但無(wú)論采用何種辦法,都是利用了死活細(xì)胞在生理機(jī)能和性質(zhì)上的差異。

          染色法分化學(xué)染色法和熒光染色法,根據(jù)染色機(jī)理的不同,染料或使死細(xì)胞著色,或使活細(xì)胞著色。

          死活細(xì)胞在生理機(jī)能和性質(zhì)上的差異主要包括:

          1、死活細(xì)胞細(xì)胞膜通透性的差異:活細(xì)胞的細(xì)胞膜是一種選擇性膜,對(duì)細(xì)胞起保護(hù)和屏障作用,只允許物質(zhì)選擇性的.通過(guò);而細(xì)胞死亡之后,細(xì)胞膜受損,通透性增加。常用的以臺(tái)盼藍(lán)鑒別細(xì)胞死活的方法就是利用了這一性質(zhì)。臺(tái)盼藍(lán),又稱錐藍(lán),是一種陰離子型染料,不能通過(guò)完整的細(xì)胞膜。所以經(jīng)臺(tái)盼藍(lán)染色后只能使死細(xì)胞著色,而活細(xì)胞不被著色。甲基藍(lán)有類似的染色機(jī)理。植物細(xì)胞的質(zhì)壁分離也可鑒定死活。

          2、死活細(xì)胞在代謝上的差異:是采用美藍(lán)染料鑒定酵母細(xì)胞死活的依據(jù)。美藍(lán)是一種無(wú)毒染料,氧化型為藍(lán)色,還原型為無(wú)色。由于活細(xì)胞中新陳代謝的作用,使細(xì)胞內(nèi)具有較強(qiáng)的還原能力,能使美藍(lán)從藍(lán)色的氧化性變?yōu)闊o(wú)色的還原型,因此美藍(lán)染色后活的酵母細(xì)胞無(wú)色;而死細(xì)胞或代謝緩慢的老細(xì)胞,則因它們的無(wú)還原能力或還原能力極弱,使美藍(lán)處于氧化態(tài),從而被染成藍(lán)色或淡藍(lán)色。

          除此之外,還有一些細(xì)胞器的專有染料。如液泡系的專有染料中性紅。中性紅是一種低毒性染料,可以使活細(xì)胞液泡著紅色,而細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核不被著色;死細(xì)胞的液泡不被著色或淺染,染料彌散于整個(gè)細(xì)胞中,細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)被染成紅色。有時(shí)侯為了增加染色效果可以將兩種染料結(jié)合使用,如甲基藍(lán)-中性紅混合染色法。

          實(shí)驗(yàn)用品

          1、材料小白鼠

          2、試劑

          臺(tái)盼藍(lán)、伊紅、PBS緩沖液、細(xì)胞培養(yǎng)液(含生長(zhǎng)因子)

          3、器材

          剪子、棉球、75%酒精、移液槍、無(wú)菌操作臺(tái)、正置光學(xué)顯微鏡、倒置光學(xué)顯微鏡、解剖盤、滴管、離心管、離心機(jī)、注射器、Eppendorf管、培養(yǎng)皿、酒精燈、塑料培養(yǎng)皿、載玻片、蓋玻片、血細(xì)胞計(jì)數(shù)板

          實(shí)驗(yàn)步驟

          1、取材

          取小鼠一只,采用斷頭法處死。清水洗小鼠浸入75%酒精中消毒3min,取出轉(zhuǎn)入超凈工作臺(tái)內(nèi)的解剖盤中,無(wú)菌操作打開腹腔,取出其脾臟,除去其周圍的脂肪組織,并用PBS液自上而下淋洗1-2次,轉(zhuǎn)入無(wú)菌培養(yǎng)皿中待用。

          2、分離脾細(xì)胞

          用滴管向培養(yǎng)皿中注入30滴PBS緩沖液,再用“L”型針頭注射器在皿中吸取0.2毫升PBS液注入脾臟,注射時(shí)沿長(zhǎng)軸注射。然后再用針頭在脾臟上扎眼,并用“L”型針頭輕輕刮出脾細(xì)胞。在均勻吹勻脾臟細(xì)胞。

          吸取上述分離的單個(gè)脾細(xì)胞懸液,放入Eppendorf管中,使量至1mL,以1000r/min離心5min。

          3、培養(yǎng)脾細(xì)胞

          取塑料培養(yǎng)皿一套,用移液槍吸取培養(yǎng)液2mL加入塑料皿中,并將皿標(biāo)記待用。取離心后的Eppendorf管,棄去上清液,用移液槍(200ul)吸取塑料皿中的培養(yǎng)液400ul加入棄去上清的Eppendorf管中,用槍頭吹勻管底的脾細(xì)胞,吸取200ul脾細(xì)胞懸液接種于上述塑料皿中,混勻后放入37°C,5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

          4、配制染液

          用生理鹽水配成5%臺(tái)盼藍(lán)染液,備用。

          5、染色

          取0.5mL細(xì)胞懸濁液放入試管中,加入1-2滴染液;旌。2-5min后將細(xì)胞放在血細(xì)胞計(jì)數(shù)板上觀察死活情況,注意不要有氣泡產(chǎn)生,放大倍數(shù)為10x10。染色后活細(xì)胞不著色,死細(xì)胞顯示藍(lán)色。注意染色時(shí)間不能超過(guò)15min,否則染液將細(xì)胞毒殺。

          6、計(jì)數(shù)

          在10x10倍的顯微鏡下觀察,計(jì)算血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的4個(gè)4小方格的細(xì)胞數(shù)量。包括細(xì)胞總數(shù)與死細(xì)胞數(shù)量。壓線者計(jì)上不計(jì)下,計(jì)左不計(jì)右。

          7、計(jì)算細(xì)胞活力

          根據(jù)公式:細(xì)胞活力=(總細(xì)胞數(shù)-死細(xì)胞數(shù))/總細(xì)胞數(shù)×100%

          實(shí)驗(yàn)結(jié)果

          臺(tái)盼藍(lán)染色后的細(xì)胞(10x10)伊紅染色后的細(xì)胞(10x10)

          總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞數(shù)統(tǒng)計(jì)表(10×10)

          項(xiàng)目自己培養(yǎng)細(xì)胞老師培養(yǎng)細(xì)胞總細(xì)胞數(shù)個(gè)/ml活細(xì)胞數(shù)個(gè)/ml細(xì)胞活力1.4×1067.5×1053.0×1055.5×10521.4%73.3%

          分析與討論

          1、結(jié)果分析

          本次實(shí)驗(yàn)中我們小組自己培養(yǎng)細(xì)胞所測(cè)細(xì)胞活力為21.4%,并不算高,分析得應(yīng)有以下原因可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果(包括誤差):

          ⑴若在無(wú)菌操作的過(guò)程中操作不規(guī)范,導(dǎo)致染菌,會(huì)極大的影響觀察,導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗。

         、迫粼陔x心分離呈單細(xì)胞的過(guò)程中離心機(jī)轉(zhuǎn)速過(guò)快或時(shí)間過(guò)長(zhǎng)很可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞破裂,導(dǎo)致小鼠脾細(xì)胞大量死亡。

          ⑶染色時(shí)間過(guò)長(zhǎng),或觀察時(shí)間過(guò)長(zhǎng)都會(huì)導(dǎo)致染色試劑將細(xì)胞殺死,使細(xì)胞活力驟降,這是導(dǎo)致細(xì)胞活力比較低的重要原因。

          ⑷實(shí)驗(yàn)中的一些操作不正確或不規(guī)范的情況、計(jì)算帶來(lái)的誤差等也會(huì)直接導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)誤差。

          2、注意事項(xiàng)

          ⑴嚴(yán)格進(jìn)行動(dòng)物消毒,需用75%酒精消毒。

         、茋(yán)格進(jìn)行無(wú)菌操作,防止細(xì)菌、霉菌、支原體污染,避免化學(xué)物質(zhì)污染。

         、俏∫后w前,瓶口和吸管硬行火焰消毒;吸取液體時(shí),避免碰撞。

         、入x心管入臺(tái)前,管口、管壁應(yīng)消毒。

         、蓪(shí)驗(yàn)者離開超凈臺(tái)時(shí),要隨時(shí)用肘部關(guān)閉工作窗。

          ⑹器材使用時(shí)既要注意用火焰消毒,又要防止?fàn)C傷、燙死細(xì)胞。

          細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告 2

          一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/strong>

          1、掌握顯示細(xì)胞中過(guò)氧化物酶反應(yīng)的原理和方法。

          2、了解細(xì)胞凋亡的生物學(xué)意義

          3、掌握凋亡細(xì)胞的形態(tài)學(xué)檢測(cè)方法

          二、實(shí)驗(yàn)原理:

          1、細(xì)胞內(nèi)的過(guò)氧化物酶能把許多胺類氧化為有色化合物,用聯(lián)苯胺處理標(biāo)本,細(xì)胞內(nèi)的過(guò)氧化物酶能把聯(lián)苯胺氧化為藍(lán)色的聯(lián)苯胺藍(lán),進(jìn)而變?yōu)樽厣a(chǎn)物,因而可以根據(jù)顏色反應(yīng)來(lái)判定過(guò)氧化物酶的有無(wú)或多少。中間產(chǎn)物藍(lán)色聯(lián)苯胺是不穩(wěn)定的,無(wú)需酶的參加即可氧化為棕色化合物。

          2、細(xì)胞凋亡是指細(xì)胞在生理或病理?xiàng)l件下,遵循自身的程序,自己結(jié)束其生命的過(guò)程。它是一個(gè)主動(dòng)的、高度有序的,基因控制的,一系列酶參與的過(guò)程。

          3、凋亡細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征是:體積變小,細(xì)胞質(zhì)濃縮;細(xì)胞核發(fā)生染色質(zhì)凝聚和聚集于核膜周圍(邊緣化);細(xì)胞膜有小泡狀形成;晚期細(xì)胞膜內(nèi)陷形成大小不同的凋亡小體;根據(jù)細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)特征進(jìn)行顯微觀察是檢測(cè)細(xì)胞凋亡的一種直觀、可靠的方法。

          三、實(shí)驗(yàn)步驟:

          細(xì)胞中過(guò)氧化物酶的顯示

          1、在載片上滴一滴PBS緩沖液;

          2、取骨髓細(xì)胞:用斷頸法處死小鼠,立即剪取后肢,去除肌肉,剝出后肢股骨,剪開股骨一端,用牙簽尖的'一端插入剪開的小孔中,摳取少許骨髓細(xì)胞置滴有PBS的載片上;

          3、涂片:用另一玻片將骨髓細(xì)胞沿一個(gè)方向涂布推開,室溫晾干;

          4、媒染:在涂片上滴0.5%硫酸銅液,以蓋滿涂片為宜,處理30秒-1分鐘。

          5、傾去硫酸銅液,直接滴入聯(lián)苯胺混合液反應(yīng)6分鐘(以蓋滿涂片為宜)

          6、清水沖洗,番紅復(fù)染2min。

          7、鏡檢:清水沖洗,室溫晾干,先低倍鏡下觀察,后換高倍鏡下觀察(油鏡100×)

          細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)檢測(cè)與觀察吉姆薩染色:

          1、取細(xì)胞爬片置于小培養(yǎng)皿中(有細(xì)胞面朝上)

          2、生理鹽水輕輕漂洗細(xì)胞

          3、95%乙醇固定5min

          4、PBS緩沖液洗2次

          5、吉姆薩染色液染色5min

          6、蒸餾水輕輕洗去染液

          7、普通光學(xué)顯微鏡下觀察。

          吖啶橙染色:

          1、取細(xì)胞爬片置于小培養(yǎng)皿中(有細(xì)胞面朝上)

          2、生理鹽水輕輕漂洗細(xì)胞

          3、甲醇:冰醋酸(3:1)固定5min

          4、PBS緩沖液洗2次每次1min

          5、0.01%吖啶橙染色液在避光環(huán)境下染色5min6、蒸餾水輕輕洗去染液

          6、選用藍(lán)光激發(fā)濾片在熒光顯微鏡下觀察。

          四、結(jié)果與分析:

          根據(jù)隨機(jī)選擇的幾個(gè)視野的統(tǒng)計(jì),該樣品的細(xì)胞凋亡率=227/506×100=44.9

          Hela細(xì)胞凋亡過(guò)程中核染色質(zhì)的形態(tài)變化(吖啶橙染色)

          五、思考題:

          1、細(xì)胞凋亡的調(diào)控機(jī)制

          細(xì)胞凋亡是一個(gè)受基因調(diào)控、眾多細(xì)胞膜受體和胞漿蛋白參與的細(xì)胞主動(dòng)自殺過(guò)程,其觸發(fā)因素多種多樣,包括細(xì)胞內(nèi)誘導(dǎo)因子和抑制因子對(duì)細(xì)胞凋亡的調(diào)控。

          2、細(xì)胞凋亡的特征

          凋亡細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征是:體積變小,細(xì)胞質(zhì)濃縮;細(xì)胞核發(fā)生染色質(zhì)凝聚和聚集于核膜周圍(邊緣化);細(xì)胞膜有小泡狀形成;晚期細(xì)胞膜內(nèi)陷形成大小不同的凋亡小體。

          3、研究細(xì)胞凋亡的方法

          定性的研究方法:常規(guī)瓊脂糖凝膠電泳、脈沖場(chǎng)倒轉(zhuǎn)瓊脂糖凝膠電泳、形態(tài)學(xué)觀察(普通光學(xué)顯微鏡、透射電鏡、熒光顯微鏡)

          定量或半定量的研究方法:各種流式細(xì)胞儀方法、原位末端標(biāo)記法、ELISA定量瓊脂糖凝膠電泳。

          細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告 3

          一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>

          1、觀察植物細(xì)胞有絲分裂的過(guò)程,識(shí)別有絲分裂的不同時(shí)期。

          2、初步掌握制作洋蔥根尖有絲分裂裝片的技能。

          3、初步掌握繪制生物圖的方法。

          二、實(shí)驗(yàn)原理

          在植物體中,有絲分裂常見于根尖、莖尖等分生區(qū)細(xì)胞,高等植物細(xì)胞有絲分裂的過(guò)程,分為分裂間期和分裂期的前期、中期、后期、末期。可以用高倍顯微鏡觀察植物細(xì)胞的有絲分裂的過(guò)程,根據(jù)各個(gè)時(shí)期細(xì)胞內(nèi)染色體(或染色質(zhì))的變化情況,識(shí)別該細(xì)胞處于有絲分裂的.哪個(gè)時(shí)期,細(xì)胞核內(nèi)的染色體容易被堿性染料著色。

          三、材料用具

          洋蔥根尖、顯微鏡、載玻片、蓋玻片、滴管、鑷子、培養(yǎng)皿、鉛筆、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15%的鹽酸、體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.01g/ml的龍膽紫(或紫藥水)

          四、實(shí)驗(yàn)過(guò)程

          1、洋蔥根尖的培養(yǎng)(提前3—4天)

          2、解離:5min

          3、漂洗:10min

          4、染色:5min

          5、制片

          6、鏡檢

          五、注意

          1、解離充分是實(shí)驗(yàn)成功的必備條件。解離充分,組織才能分散,細(xì)胞也不會(huì)重疊。

          2、漂洗時(shí)間一定要足夠,否則細(xì)胞染不上色。

          3、染色時(shí),染液的濃度和染色時(shí)間必須掌握好。特別是染色不能過(guò)深,否則鏡下一片紫色,無(wú)法觀察。

          六、討論

          1、制作好洋蔥根尖有絲分裂裝片的關(guān)鍵是什么?談?wù)勀阕约旱捏w會(huì)。

          2、在觀察清楚有絲分裂各個(gè)時(shí)期的細(xì)胞以后,繪出洋蔥根尖細(xì)胞有絲分裂的簡(jiǎn)圖,并標(biāo)明時(shí)期。

          細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告 4

          一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>

          1、初步掌握高倍顯微鏡的使用方法。

          2、觀察高等植物的葉綠體在細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中的形態(tài)和分布

          二、實(shí)驗(yàn)原理

          高等植物的葉綠體呈橢球狀,在不同的光照條件下,葉綠體可以運(yùn)動(dòng),改變橢球體的方向,這樣既能接受較多的光照,又不至于被強(qiáng)光灼傷。在強(qiáng)光下,葉綠體以其橢球體的側(cè)面朝向光源;在弱光下,葉綠體以其橢球體的正面朝向光源。因此,在不同光照條件下采集的葫蘆蘚,其小葉內(nèi)葉綠體橢球體的形狀不完全一樣。

          活細(xì)胞中的細(xì)胞質(zhì)處于不斷的流動(dòng)狀態(tài),觀察細(xì)胞質(zhì)的.流動(dòng),可以用細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中的葉綠體的運(yùn)動(dòng)做為標(biāo)志。

          三、材料用具

          蘚類的葉,新鮮的黑藻,顯微鏡,載玻片,蓋玻片,滴管,鑷子,刀片,培養(yǎng)皿,鉛筆

          四、實(shí)驗(yàn)過(guò)程

          1.制作蘚類葉片的臨時(shí)裝片

          2.用顯微鏡觀察葉綠體

          3.制作黑藻葉片臨時(shí)裝片

          4.用顯微鏡觀察細(xì)胞質(zhì)流動(dòng)

          五、討論

          1.細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中的葉綠體是否靜止不動(dòng),為什么?

          2.葉綠體的形態(tài)和分布與葉綠體的功能有什么關(guān)系?

          3.植物細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)處于不斷的流動(dòng)狀態(tài),這對(duì)于活細(xì)胞完成生命活動(dòng)有什么意義?

          4.用鉛筆畫一個(gè)葉片細(xì)胞,標(biāo)出葉綠體的大致流動(dòng)方向。

          細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告 5

          一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>

          1. 初步學(xué)會(huì)觀察植物細(xì)胞質(zhì)壁分離和復(fù)原的方法。

          2. 理解植物細(xì)胞發(fā)生滲透作用的原理。

          二、實(shí)驗(yàn)原理

          當(dāng)細(xì)胞液的濃度小于外界溶液的濃度時(shí),細(xì)胞液中的水分就通過(guò)原生質(zhì)層進(jìn)入外界溶液中,使細(xì)胞壁和原生質(zhì)層都出現(xiàn)一定的收縮。由于原生質(zhì)層比細(xì)胞壁的收縮性大,當(dāng)細(xì)胞不斷失水時(shí),原生質(zhì)層就會(huì)與細(xì)胞壁逐漸分離開,也就是分升了質(zhì)壁分離當(dāng)細(xì)胞液的'濃度大于外界溶液的濃度時(shí),外界溶液中的水分就通過(guò)原生質(zhì)層進(jìn)入細(xì)胞液中,整個(gè)原生質(zhì)層就會(huì)慢慢地恢復(fù)成原來(lái)的狀態(tài),使植物細(xì)胞逐漸發(fā)生質(zhì)壁分離復(fù)原。

          三、材料用具

          紫色洋蔥鱗片葉、顯微鏡、載玻片、蓋玻片、滴管、鑷子、刀片、吸水紙、清水、0.3g/ml蔗糖溶液

          四、實(shí)驗(yàn)過(guò)程

          物理實(shí)驗(yàn)報(bào)告 ——化學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告 ——生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告 ——實(shí)驗(yàn)報(bào)告格式 ——實(shí)驗(yàn)報(bào)告模板

          五、討論

          1.如果將洋蔥表皮細(xì)胞浸潤(rùn)在與細(xì)胞液濃度相同的蔗糖溶液中,這些表皮細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)什么現(xiàn)象?

          2.當(dāng)紅細(xì)胞細(xì)胞膜兩側(cè)的溶液具有濃度差時(shí),紅細(xì)胞會(huì)不會(huì)發(fā)生質(zhì)壁分離現(xiàn)象?為什么?

          3.畫一個(gè)細(xì)胞在正常狀態(tài)下到經(jīng)過(guò)0.3g/ml蔗糖溶液處理,再經(jīng)過(guò)清水處理的細(xì)胞變化的一系列模式圖。

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